| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 L-丝氨酸的理化性质、功能和用途 | 第10-11页 |
| 1.1.1 L-丝氨酸的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 L-丝氨酸的功能和用途 | 第10-11页 |
| 1.2 L-丝氨酸的相关代谢过程 | 第11-14页 |
| 1.2.1 L-丝氨酸的合成代谢 | 第11页 |
| 1.2.2 L-丝氨酸的分解代谢 | 第11-12页 |
| 1.2.3 糖酵解途径对L-丝氨酸合成的影响 | 第12-13页 |
| 1.2.4 敲除竞争性副产物的合成路径 | 第13页 |
| 1.2.5 L-丝氨酸的运输 | 第13-14页 |
| 1.3 进化工程应用 | 第14-16页 |
| 1.3.1 提高菌体对环境的适应能力及对有害物质的耐受进化 | 第14页 |
| 1.3.2 激活细胞潜在的代谢途径,提高底物利用效率 | 第14-15页 |
| 1.3.3 改变细胞的生物基产品合成能力 | 第15-16页 |
| 1.4 L-丝氨酸的生产方法及国内外研究现状 | 第16-18页 |
| 1.4.1 废蚕丝水解液提取法生产L-丝氨酸 | 第16页 |
| 1.4.2 化学合成法生产L-丝氨酸 | 第16页 |
| 1.4.3 酶法生产L-丝氨酸 | 第16-17页 |
| 1.4.4 微生物发酵法生产L-丝氨酸的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.5 提高大肠杆菌生产L-丝氨酸生物合成的代谢工程改造策略 | 第18页 |
| 1.6 本课题选题背景和研究内容 | 第18-22页 |
| 1.6.1 本课题的选题背景 | 第18-19页 |
| 1.6.2 本课题研究内容 | 第19-22页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第24-26页 |
| 2.1.4 溶剂及培养基配制 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 引物设计和基因测序 | 第28页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第28-31页 |
| 2.2.3 PCR产物的纯化或PCR产物的切胶回收 | 第31页 |
| 2.2.4 PCR产物酶切、去磷酸化和酶连 | 第31-32页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.6 大肠杆菌基因组的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.7 大肠杆菌质粒的提取(碱裂解法) | 第33页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的提取(试剂盒法) | 第33-34页 |
| 2.2.9 大肠杆菌化转感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.10 大肠杆菌化转感受态细胞的转化 | 第34-35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌电转感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.12 大肠杆菌电转感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 2.2.13 大肠杆菌基因组的目的基因的敲除与过表达 | 第35-36页 |
| 2.2.14 菌株培养与发酵 | 第36-37页 |
| 2.2.15 葡萄糖浓度、菌体浓度、发酵产物的测定 | 第37-40页 |
| 第3章 利用进化工程改造大肠杆菌生产L-丝氨酸 | 第40-54页 |
| 3.1 glyA敲除工程菌E4G1的适应性实验室进化 | 第40-42页 |
| 3.1.1 工程菌E4G1在不同培养基中的生长曲线 | 第40-41页 |
| 3.1.2 解除工程菌E4G1对甘氨酸依赖的适应化进化 | 第41-42页 |
| 3.2 进化菌E系列的表型的初步分析 | 第42-48页 |
| 3.2.1 进化菌的筛选 | 第42-43页 |
| 3.2.2 质粒的筛选 | 第43-46页 |
| 3.2.3 培养基的优化 | 第46-48页 |
| 3.3 大肠杆菌3-磷酸甘油酸脱氢酶突变点引入对L-丝氨酸的影响 | 第48-51页 |
| 3.3.1 质粒pZ10的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.2 发酵表征 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-54页 |
| 第4章 大肠杆菌理性代谢工程的改造生产L-丝氨酸 | 第54-70页 |
| 4.1 菌株的基因工程改造 | 第54-62页 |
| 4.1.1 编码磷酸甘油酸酯变位酶的gpmA基因的敲除 | 第54-56页 |
| 4.1.2 丙酮酸激酶pykF基因的敲除 | 第56-58页 |
| 4.1.3 乙酸合成ackA-pta基因的敲除 | 第58-59页 |
| 4.1.4 基因组serC位点整合L-丝氨酸合成路径基因 | 第59-62页 |
| 4.2 菌株的发酵结果与分析 | 第62-68页 |
| 4.2.1 敲除EMP途径的gpmA基因对L-丝氨酸合成的影响 | 第62-64页 |
| 4.2.2 敲除竞争途径的pykF基因对L-丝氨酸合成的影响 | 第64-65页 |
| 4.2.3 敲除乙酸合成基因ackA-pta对L-丝氨酸合成的影响 | 第65-66页 |
| 4.2.4 L-丝氨酸合成路径基因插入工程菌的发酵表征 | 第66-68页 |
| 4.3 本章小结 | 第68-70页 |
| 第5章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 5.1 主要实验结论 | 第70-71页 |
| 5.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
