| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-40页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 炎症性肠病(IBD)概述 | 第13-28页 |
| 1.2.1 IBD分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 IBD的发现 | 第14页 |
| 1.2.3 IBD的流行病学 | 第14-16页 |
| 1.2.4 IBD的病因 | 第16-25页 |
| 1.2.5 IBD的常见症状、诊断方法以及治疗策略 | 第25-28页 |
| 1.3 IBD的动物模型 | 第28-31页 |
| 1.3.1 IBD小鼠模型 | 第28-29页 |
| 1.3.2 IBD斑马鱼模型 | 第29-31页 |
| 1.4 PIK3C3简介 | 第31-34页 |
| 1.4.1 PIK3C3的主要功能 | 第31-32页 |
| 1.4.2 PIK3C3第二类复合物蛋白结构 | 第32-33页 |
| 1.4.3 Pik3c3基因敲除小鼠模型 | 第33-34页 |
| 1.4.4 PI3P相关信号通路 | 第34页 |
| 1.5 斑马鱼小肠发育及常用基因敲降/敲除技术 | 第34-39页 |
| 1.5.1 斑马鱼小肠早期发育 | 第35-36页 |
| 1.5.2 Morpholino技术在斑马鱼中的应用 | 第36-37页 |
| 1.5.3 基因编辑技术在斑马鱼中的应用 | 第37-39页 |
| 1.6 本课题的设计思路 | 第39-40页 |
| 第2章 材料与方法 | 第40-76页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-45页 |
| 2.1.1 斑马鱼品系 | 第40页 |
| 2.1.2 本课题使用的质粒 | 第40页 |
| 2.1.3 本课题使用的抗体 | 第40-41页 |
| 2.1.4 本课题使用的细胞系 | 第41页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.1.6 实验试剂 | 第42-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-76页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第45-51页 |
| 2.2.2 CRISPR-Cas9基因敲除斑马鱼品系的建立 | 第51-57页 |
| 2.2.3 Tol2系统构建转基因斑马鱼品系Tg(ubb:2xFYVE-EGFP) | 第57-58页 |
| 2.2.4 斑马鱼消化功能的分析 | 第58页 |
| 2.2.5 斑马鱼整体原位杂交 | 第58-62页 |
| 2.2.6 斑马鱼石蜡切片及H&E染色 | 第62-64页 |
| 2.2.7 斑马鱼冰冻切片及免疫荧光 | 第64-66页 |
| 2.2.8 斑马鱼总RNA的提取及qRT-PCR | 第66-68页 |
| 2.2.9 斑马鱼RNAseq以及数据分析 | 第68-69页 |
| 2.2.10 斑马鱼透射电子显微镜成像 | 第69-70页 |
| 2.2.11 斑马鱼肠道微生物计数 | 第70-71页 |
| 2.2.12 斑马鱼无菌培养 | 第71页 |
| 2.2.13 斑马鱼Western Blot | 第71-73页 |
| 2.2.14 斑马鱼尾鳍损伤诱导炎症反应 | 第73-74页 |
| 2.2.15 Caco2体外3D培养 | 第74页 |
| 2.2.16 数据分析 | 第74-76页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第76-100页 |
| 3.1 实验结果 | 第76-95页 |
| 3.1.1 pik3c3敲除突变体小肠结构异常 | 第76-79页 |
| 3.1.2 pik3c3敲除突变体小肠组织基因表达水平的变化 | 第79-82页 |
| 3.1.3 pik3c3敲除突变体激活了炎症反应 | 第82页 |
| 3.1.4 中性粒细胞在pik3c3敲除突变体的小肠上皮处聚集 | 第82-84页 |
| 3.1.5 pik3c3敲除突变体中上皮屏障相关基因异常表达 | 第84-86页 |
| 3.1.6 pik3c3敲除突变体中的炎症反应不依赖于肠道微生物 | 第86-89页 |
| 3.1.7 pik3c3敲除突变体小肠上皮中PI3P减少 | 第89-91页 |
| 3.1.8 pik3c3敲除突变体小肠上皮中E-Cadherin分布异常 | 第91-92页 |
| 3.1.9 pik3c3敲除突变体小肠的缺陷不依赖于自噬 | 第92-94页 |
| 3.1.10 pik3c3敲除突变体小肠的缺陷不依赖于内质网应激 | 第94-95页 |
| 3.2 讨论 | 第95-100页 |
| 3.2.1 本课题的主要结论 | 第95页 |
| 3.2.2 本课题的创新之处 | 第95-97页 |
| 3.2.3 有待解决的问题 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 附录1 相关试剂的配制 | 第115-117页 |
| 附录2 qRT-PCR所用的引物名称及序列 | 第117-118页 |
| 附录3 缩略词表 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第121页 |
