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拟南芥中一个功能获得性胁迫抗性变体的筛选与分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
缩写词第7-11页
前言第11-21页
   ·逆境胁迫对植物的伤害第11页
   ·ABA 与逆境胁迫第11-14页
     ·植物干旱应答反应及与 ABA 的关系第12-13页
     ·脱落酸与其他胁迫第13-14页
   ·ABA 在生长发育中的作用第14-15页
   ·ABA 受体及信号转导的研究第15-17页
   ·ABA 与其它激素的互作第17-18页
   ·细胞色素 P450 超家族与激素代谢第18页
   ·化学诱导型启动子 XVE 系统原理及特点第18-19页
   ·立题依据第19-21页
2 材料与方法第21-35页
   ·实验仪器第21页
   ·实验材料、载体和菌株第21-22页
     ·材料第21页
     ·菌株与质粒载体第21-22页
   ·实验试剂第22页
   ·常用溶液及培养基的配制第22-23页
     ·常用溶液的配制第22页
     ·常用培养基的配制第22-23页
     ·拟南芥 DNA 抽提液第23页
     ·拟南芥叶肉细胞原生质体瞬时表达溶液第23页
     ·抗生素的配制第23页
   ·实验方法第23-31页
     ·拟南芥种植方法第23-24页
     ·拟南芥杂交方法第24页
     ·拟南芥基因组 DNA 提取方法第24页
     ·Trizol 法提取拟南芥总 RNA第24页
     ·反转录制备拟南芥 cDNA第24-25页
     ·目的基因片段的扩增第25-26页
     ·酶切产物的回收与纯化第26-27页
     ·质粒 DNA 的提取第27页
     ·酶切产物的连接第27-28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第28-29页
     ·重组质粒的鉴定第29页
     ·农杆菌感受态细胞的制备及转化第29-30页
     ·PEG 介导拟南芥叶肉细胞原生质体瞬时表达方法第30页
     ·共聚焦显微镜观察 GFP 与叶绿体自发荧光共定位第30-31页
     ·β-葡糖苷酸酶(GUS)的组织化学染色第31页
     ·拟南芥潜在转基因植物的筛选第31页
   ·TAIL-PCR 技术第31-35页
     ·TAIL-PCR 原理第31-33页
     ·TAIL-PCR 的反应条件和引物设计第33-34页
     ·产物分析第34-35页
3 结果与分析第35-55页
   ·突变体的获得第35-36页
   ·利用 TAIL-PCR 方法克隆拟南芥 GAR16 基因第36-39页
     ·突变体 gar16 的 T-DNA 插入鉴定及 TAIL-PCR第36-37页
     ·TAIL-PCR 产物测序及序列比对第37-38页
     ·T-DNA 插入侧翼序列位置验证第38-39页
     ·T-DNA 插入对基因 GAR16 表达的影响第39页
   ·突变体 gar16 的表型分析第39-49页
     ·ABA 对突变体 gar16 和 WT 萌发及子叶生长的影响第40-42页
     ·甘露醇、NaCl、PAC 和 SA 等对 gar16 和 WT 萌发及子叶生长的影响第42-44页
     ·ABA 对突变体 gar16 和 WT 根伸长的影响第44-46页
     ·H2O2对突变体 gar16 和 WT 根伸长的影响第46-47页
     ·其他胁迫处理对突变体 gar16 和 WT 根伸长的影响第47-49页
   ·GAR16 对相关基因表达的影响第49页
   ·GAR16 与多种胁迫应答第49-50页
   ·GAR16 的组织定位第50-52页
     ·相关载体的构建及转基因植株的筛选第50-51页
     ·GUS 染色及 RT-PCR 方法分析 GAR16 的组织表达情况第51-52页
   ·GAR16 的亚细胞定位第52-55页
     ·相关的载体构建第52页
     ·GAR16 蛋白亚细胞定位分析第52-55页
4 讨论第55-57页
5 结论第57-59页
参考文献第59-65页
致谢第65-66页

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