| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 1. 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 miRNA的发现及特征 | 第13-15页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第13-14页 |
| 1.1.2 miRNA的特征 | 第14-15页 |
| 1.2 miRNA的生物合成及作用机制 | 第15-18页 |
| 1.2.1 miRNA的生物合成过程 | 第15-17页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.3 植物中的miRNA与siRNA | 第18-19页 |
| 1.4 植物miRNA的功能 | 第19-21页 |
| 1.4.1 miRNA与植物的生长发育 | 第19-20页 |
| 1.4.2 miRNA与植物的抗逆性 | 第20-21页 |
| 1.4.3 miRNA调控植物自身代谢 | 第21页 |
| 1.4.4 miRNA~*的功能 | 第21页 |
| 1.5 植物miRNA的起源和进化 | 第21-22页 |
| 1.6 植物miRNA的研究方法 | 第22-24页 |
| 1.6.1 小分子RNA克隆法 | 第23-24页 |
| 1.6.2 高通量测序技术 | 第24页 |
| 1.6.3 miRNA生物信息学分析 | 第24页 |
| 1.7 miRNA靶基因的研究 | 第24-25页 |
| 1.8 植物miRNA及其靶基因的验证方法 | 第25-26页 |
| 1.8.1 miRNA的实验验证 | 第25页 |
| 1.8.2 miRNA靶基因的真实性验证 | 第25-26页 |
| 1.9 目的和意义 | 第26-27页 |
| 1.10 技术路线 | 第27-28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-40页 |
| 2.1 材料、试剂、仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.1 香蕉供试材料 | 第28页 |
| 2.1.2 应用的分析软件及数据库 | 第28页 |
| 2.1.3 试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 相关序列数据的获得 | 第29页 |
| 2.2.2 潜在香蕉miRNA生物信息学预测 | 第29-30页 |
| 2.2.3 miRNA家族的保守性 | 第30页 |
| 2.2.4 miRNA的种系发育树 | 第30页 |
| 2.2.5 香蕉miRNA靶基因的生物信息学预测 | 第30-31页 |
| 2.2.6 香蕉不同组织RNA的提取及检测 | 第31-33页 |
| 2.2.6.1 香蕉幼嫩叶片小分子RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 香蕉不同组织总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.6.3 RNA的检测 | 第32-33页 |
| 2.2.7 香蕉miRNA及其靶基因的实验验证 | 第33-40页 |
| 2.2.7.1 miRNA引物的设计与合成 | 第33-36页 |
| 2.2.7.2 miRNA靶基因引物的设计与合成 | 第36页 |
| 2.2.7.3 利用茎环引物的RT-PCR方法检测miRNA及其靶基因 | 第36-38页 |
| 2.2.7.4 miRNA特异性扩增片段回收 | 第38页 |
| 2.2.7.5 回收产物与克隆载体的连接 | 第38页 |
| 2.2.7.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.7.7 连接产物转化E.coli DH5α | 第39页 |
| 2.2.7.8 挑选单克隆和鉴定 | 第39页 |
| 2.2.7.9 Stem-loop qRT-PCR检测miRNA及其靶基因的表达量 | 第39-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-65页 |
| 3.1 预测的香蕉miRNA | 第40-42页 |
| 3.2 香蕉miRNA前体分析 | 第42-45页 |
| 3.3 植物miRNA的保守性分析 | 第45-52页 |
| 3.3.1 miRNA在不同植物中分布的多样性比较 | 第45-46页 |
| 3.3.2 不同植物同一家族中miRNA序列的同源性分析 | 第46-49页 |
| 3.3.3 miR156家族的分子进化及种系发育分析 | 第49-52页 |
| 3.3.3.1 miR156家族前体序列的比对及分析 | 第49-50页 |
| 3.3.3.2 miR156家族进化树分析 | 第50-52页 |
| 3.4 香蕉miRNA靶基因的预测及功能分析 | 第52-54页 |
| 3.5 香蕉幼嫩叶片中的小分子RNA | 第54页 |
| 3.6 香蕉4种组织的总RNA分析 | 第54-55页 |
| 3.7 香蕉不同组织miRNA及其靶基因的RT-PCR检测 | 第55-59页 |
| 3.7.1 香蕉幼嫩叶片中miRNA的RT-PCR检测 | 第56页 |
| 3.7.2 香蕉不同组织miRNA的RT-PCR检测 | 第56-58页 |
| 3.7.3 香蕉不同组织miRNA靶基因的RT-PCR检测 | 第58-59页 |
| 3.8 miRNA及其靶基因实时荧光定量PCR的验证及表达分析 | 第59-65页 |
| 3.8.1 cDNA模板的优化选择 | 第59-60页 |
| 3.8.2 香蕉miRNA的差异表达研究 | 第60-62页 |
| 3.8.2.1 香蕉幼嫩叶片中几种miRNA的差异表达 | 第60页 |
| 3.8.2.2 香蕉幼嫩叶片中几种miRNA的熔解曲线分析 | 第60-61页 |
| 3.8.2.3 香蕉不同组织中miRNA的差异表达研究 | 第61-62页 |
| 3.8.3 香蕉不同组织中miRNA靶基因的差异表达研究 | 第62-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-69页 |
| 4.1 miRNA的生物信息学研究 | 第65页 |
| 4.2 miR399与miR399~*的真实性讨论 | 第65页 |
| 4.3 miRNA的保守性和多样性 | 第65-66页 |
| 4.4 miRNA与基因表达调控 | 第66页 |
| 4.5 miRNA的RT-PCR检测 | 第66页 |
| 4.6 miRNA的表达特性 | 第66-67页 |
| 4.7 miRNA及其靶基因的关系 | 第67-68页 |
| 4.8 miRNA靶基因的RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| 5. 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
