| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| ·角蛋白 | 第10-11页 |
| ·产角蛋白酶的微生物 | 第11页 |
| ·角蛋白酶活力测定方法 | 第11-12页 |
| ·角蛋白酶的分类及理化性质 | 第12-13页 |
| ·角蛋白酶的分子生物学研究 | 第13-14页 |
| ·角蛋白酶作用的机理 | 第14-15页 |
| ·角蛋白酶的应用 | 第15页 |
| ·角蛋白酶的研究现状及其应用存在的问题 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 角蛋白降解菌Bacillus subtilis B-3的分离与鉴定 | 第17-30页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| ·样品来源 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·分子生物学试剂 | 第17-18页 |
| ·主要药品 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·溶液配制 | 第18-19页 |
| ·DNA提取溶液 | 第18页 |
| ·琼脂糖电泳缓冲液 | 第18-19页 |
| ·角蛋白酶酶活测定溶液 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-24页 |
| ·菌种的筛选 | 第19-20页 |
| ·富集培养 | 第19页 |
| ·菌种的分离 | 第19页 |
| ·角蛋白酶产生菌的初筛 | 第19-20页 |
| ·角蛋白酶发酵 | 第20页 |
| ·菌种的鉴定 | 第20-23页 |
| ·生理生化鉴定 | 第20页 |
| ·基因组总DNA提取 | 第20页 |
| ·16s rDNA扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第21页 |
| ·扩增片段的T载体克隆 | 第21-22页 |
| ·阳性克隆菌株的筛选及鉴定 | 第22-23页 |
| ·系统进化树分析 | 第23页 |
| ·酶活的测定 | 第23-24页 |
| ·角蛋白酶活测定方法 | 第23-24页 |
| ·角蛋白酶活力的计算 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-29页 |
| ·角蛋白酶产生菌的分离与筛选 | 第24页 |
| ·羽毛降解实验 | 第24-26页 |
| ·细菌鉴定 | 第26-29页 |
| ·形态学观察 | 第26页 |
| ·生理生化培养特性 | 第26-27页 |
| ·16S rDNA的扩增与序列分析 | 第27-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌kerC基因的克隆及其在E.coli(DE3)中的融合表达 | 第30-53页 |
| 1 材料 | 第30-34页 |
| ·菌株及载体 | 第30-31页 |
| ·分子生物学试剂 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·常用缓冲液 | 第32-33页 |
| ·角蛋白酶酶活测定溶液 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-42页 |
| ·kerC基因克隆 | 第34-37页 |
| ·基因组总DNA提取 | 第34页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·kerC基因PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第35页 |
| ·目的片段与T载体连接 | 第35-36页 |
| ·转化 | 第36页 |
| ·重组克隆质粒检测 | 第36页 |
| ·序列测定与分析 | 第36-37页 |
| ·kerC基因在E.coli BL21中原核表达 | 第37-40页 |
| ·kerC基因高保真扩增 | 第37页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第37页 |
| ·表达载体质粒及目的片段酶切消化 | 第37-38页 |
| ·酶切产物纯化 | 第38页 |
| ·连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·转化 | 第38-39页 |
| ·阳性菌株的筛选及鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组菌株pET-kerC在大肠杆菌中的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组菌株的诱导表达及酶活测定 | 第40页 |
| ·重组蛋白His-Tag纯化 | 第40页 |
| ·重组菌株的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·角蛋白酶酶学性质研究 | 第41-42页 |
| ·重组角蛋白酶最适反应温度的测定 | 第41页 |
| ·重组角蛋白酶热稳定性的测定 | 第41-42页 |
| ·重组角蛋白酶最适反应pH的测定 | 第42页 |
| ·重组角蛋白酶pH稳定性的测定 | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-50页 |
| ·角蛋白酶基因kerC克隆 | 第42-46页 |
| ·角蛋白酶基因表达片段的扩增 | 第42-43页 |
| ·DNA测序和生物信息学分析 | 第43-46页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·kerC诱导表达 | 第47-48页 |
| ·酶活测定 | 第48页 |
| ·重组角蛋白酶酶学性质研究 | 第48-50页 |
| ·的最适反应温度 | 第48页 |
| ·角蛋白酶热稳定性 | 第48-49页 |
| ·角蛋白酶的最适反应pH | 第49-50页 |
| ·角蛋白酶的pH稳定性 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·kerC基因克隆 | 第50-51页 |
| ·kerC基因原核表达 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第59页 |