| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| 1.1 动物转基因技术简介 | 第10-17页 |
| 1.1.1 转基因动物研究历史 | 第10页 |
| 1.1.2 转基因动物的制作方法 | 第10-14页 |
| 1.1.3 转基因动物的应用 | 第14-17页 |
| 1.2 转基因克隆动物的现状 | 第17-18页 |
| 1.2.1 转基因克隆动物存在的问题 | 第17页 |
| 1.2.2 转基因克隆动物的应用前景 | 第17-18页 |
| 1.3 溶菌酶的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 溶菌酶的生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.3.2 溶菌酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 重组人溶菌酶的研究现状 | 第20页 |
| 1.4 外源基因整合位点的分析 | 第20-26页 |
| 1.4.1 热不对称交错 PCR( TAIL-PCR ) | 第20-21页 |
| 1.4.2 DW-ACPTM法 | 第21-23页 |
| 1.4.3 T 接头 PCR ( T-Linker PCR ) | 第23-25页 |
| 1.4.4 PCR-walking | 第25页 |
| 1.4.5 双链接头 PCR | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的内容和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 人溶菌酶转基因克隆牛 | 第27页 |
| 2.1.2 生化药品及试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 缓冲液及主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第29页 |
| 2.1.5 DNA 分析软件 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 基因组 DNA 的提取 | 第30页 |
| 2.2.2. TAIL-PCR 对 3′侧翼序列的扩增 | 第30-33页 |
| 2.2.3 PCR 产物纯化及回收 | 第33页 |
| 2.2.4 PMD19-T 载体连接反应 | 第33-34页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| 2.2.6 重组质粒检测及测序 | 第34-35页 |
| 2.2.7 外源基因 3’侧翼序列的验证 | 第35-36页 |
| 2.2.8 外源基因 5’侧翼序列的扩增及序列分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-45页 |
| 3.1 基因组 DNA 的提取和检测结果 | 第37页 |
| 3.2 TAIL-PCR 对外源基因 3′侧翼序列的扩增结果 | 第37-40页 |
| 3.2.1 个体 0503 的 3′侧翼序列扩增结果 | 第37-38页 |
| 3.2.2 个体福洋的 3′侧翼序列扩增结果 | 第38页 |
| 3.2.3 外源基因 3′侧翼序列测定和结果分析 | 第38-40页 |
| 3.3 外源基因 3′端侧翼序列验证 | 第40-41页 |
| 3.4 外源基因 5′端侧翼序列的扩增及分析 | 第41-43页 |
| 3.5 外源基因整合位点的确定及结构示意图 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 关于整合位点的克隆 | 第45页 |
| 4.2 整合位点的特征分析 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 在读期间发表学术论文 | 第55-57页 |
| 简历 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
