| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1 灵芝的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 灵芝的简介 | 第12页 |
| 1.2 灵芝药理研究现状 | 第12-14页 |
| 1.2.1 生活中的灵芝 | 第12-13页 |
| 1.2.2 灵芝的功效成分 | 第13页 |
| 1.2.3 灵芝的药理作用 | 第13-14页 |
| 2 microRNA的研究进展 | 第14-19页 |
| 2.1 microRNA的简介 | 第14-15页 |
| 2.2 microRNA的生物学特点 | 第15页 |
| 2.3 microRNA的生物学合成和作用机制 | 第15-17页 |
| 2.3.1 microRNA的生物合成 | 第15-16页 |
| 2.3.2 microRNA的作用机制 | 第16-17页 |
| 2.4 microRNA的鉴定方法 | 第17-18页 |
| 2.4.1 高通量测序鉴定microRNA | 第17页 |
| 2.4.2 生物信息学鉴定microRNA | 第17-18页 |
| 2.4.3 克隆测序鉴定microRNA | 第18页 |
| 2.5 microRNA鉴定后的验证方法 | 第18-19页 |
| 2.5.1 实时荧光定量PCR鉴定microRNA | 第18-19页 |
| 2.5.2 Northern Blotting鉴定microRNA | 第19页 |
| 2.5.3 Gene Chip技术鉴定microRNA | 第19页 |
| 3 真菌小RNA的研究进展 | 第19-20页 |
| 4 灵芝中microRNA的研究进展 | 第20-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 实验目的与意义 | 第21页 |
| 2 实验内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第三章 不同方法对灵芝子实体、灵芝孢子粉的总RNA提取的比较 | 第23-27页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| 1.1 材料、试剂与仪器 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 1.2.1 两种方法提取总RNA | 第23-25页 |
| 1.2.2 浓度纯度及电泳检测 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-27页 |
| 第四章 灵芝小分子RNA文库的构建、高通量测序与生物信息学分析 | 第27-46页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 材料与数据库 | 第27-28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 1.2.1 灵芝子实体总RNA的提取及小RNA的分离 | 第28页 |
| 1.2.2 小分子RNA测序文库的构建及高通量测序 | 第28-29页 |
| 1.2.3 测序结果分析 | 第29-30页 |
| 1.2.4 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-44页 |
| 2.1 灵芝总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2 灵芝小RNA的测序结果分析 | 第31-37页 |
| 2.2.1 原始测序Reads（数据）质量基本统计 | 第31-32页 |
| 2.2.2 Reads质量的预处理 | 第32-33页 |
| 2.2.3 ncRNA的总体分析 | 第33-34页 |
| 2.2.4 基因组比对分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 Reads的比对位置分类注释 | 第35-37页 |
| 2.3 生物信息学分析 | 第37-44页 |
| 2.3.1 已知miRNA和新的miRNA的分析 | 第37-43页 |
| 2.3.2 miRNA的同源性与进化分析 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 灵芝microRNA的鉴定 | 第46-59页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第47-50页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第47-50页 |
| 1.1.1 试剂与仪器 | 第47页 |
| 1.1.2 试剂配置 | 第47-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-58页 |
| 2.1 qRT-PCR法对灵芝microRNA的鉴定验证 | 第50-53页 |
| 2.1.1 灵芝子实体总RNA的提取 | 第50页 |
| 2.1.2 荧光定量PCR引物设计 | 第50-51页 |
| 2.1.3 逆转录反应合成cDNA | 第51-52页 |
| 2.1.4 荧光定量PCR分析 | 第52页 |
| 2.1.5 荧光定量PCR数据的处理 | 第52-53页 |
| 2.2 Northern blotting法对灵芝microRNA的鉴定验证 | 第53-56页 |
| 2.2.1 灵芝子实体总RNA的提取 | 第53页 |
| 2.2.2 Northern blotting引物的设计 | 第53页 |
| 2.2.3 Northern blotting方法与过程 | 第53-56页 |
| 2.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 2.3.1 qRT-PCR中灵芝总RNA的提取 | 第56页 |
| 2.3.2 qRT-PCR中目的miRNA的熔解曲线 | 第56-57页 |
| 2.3.3 采用qRT-PCR验证目的miRNA的表达情况 | 第57页 |
| 2.3.4 用于Northern blotting的灵芝子实体总RNA的提取 | 第57页 |
| 2.3.5 采用Northern blotting验证目的miRNA的表达情况 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
