| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| 1.1 小花棘豆内生真菌研究 | 第10-11页 |
| 1.2 酵母氨酸还原酶基因 | 第11-12页 |
| 1.3 苦马豆素 | 第12-19页 |
| 1.3.1 苦马豆素概述 | 第12-13页 |
| 1.3.2 苦马豆素分离与检测 | 第13-15页 |
| 1.3.3 苦马豆素的生物合成 | 第15-19页 |
| 1.4 赖氨酸代谢相关途径的研究 | 第19-22页 |
| 1.4.1 α -氨基己二酸合成途径 | 第19-21页 |
| 1.4.2 二氨基庚二酸合成途径 | 第21页 |
| 1.4.3 赖氨酸分解途径 | 第21-22页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 研究材料 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂材料 | 第23-25页 |
| 2.1.2.1 试剂 | 第23页 |
| 2.1.2.2 药品配制 | 第23-25页 |
| 2.1.3 引物 | 第25-26页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第26页 |
| 2.2 研究方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 小花棘豆内生真菌培养 | 第26页 |
| 2.2.1.1 培养基配制 | 第26页 |
| 2.2.1.2 接种 | 第26页 |
| 2.2.2 内生真菌总RNA提取与反转录PCR | 第26-30页 |
| 2.2.2.1 野生菌株和突变菌株总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 总RNA浓度及纯度检测 | 第27页 |
| 2.2.2.3 cDNA合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 酵母氨酸还原酶RT-PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 突变型菌株潮霉素磷酸转移酶RT-PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基内添加化合物对野生菌株和突变菌株内苦马豆素合成代谢的影响 | 第30页 |
| 2.2.3.1 添加α-氨基己二酸培养 | 第30页 |
| 2.2.3.2 添加赖氨酸培养 | 第30页 |
| 2.2.3.3 添加吡啶羧酸培养 | 第30页 |
| 2.2.4 小花棘豆内生真菌中苦马豆素的提取与检测 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 苦马豆素提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 酶分析法检测苦马豆素 | 第31页 |
| 2.2.5 小花棘豆内生真菌中苦马豆素合成前体化合物酵母氨酸和赖氨酸的检测 | 第31-33页 |
| 2.2.5.1 酵母氨酸及赖氨酸的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 液相色谱-质谱联用法检测 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-51页 |
| 3.1 小花棘豆内生真菌培养 | 第33-34页 |
| 3.2 小花棘豆内生真菌酵母氨酸还原酶基因研究 | 第34-37页 |
| 3.2.1 小花棘豆内生真菌总RNA检测结果 | 第34-35页 |
| 3.2.2 酵母氨酸还原酶cDNA检测结果 | 第35-37页 |
| 3.2.2.1 OW7.8菌株内酵母氨酸还原酶基因表达检测 | 第35-37页 |
| 3.2.2.2 M1菌株内潮霉素抗性基因表达检测 | 第37页 |
| 3.3 培养基添加不同化合物对内生真菌苦马豆素合成的影响 | 第37-39页 |
| 3.3.1 培养基添加α-氨基己二酸培养的菌株内苦马豆素含量变化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 培养基添加L-赖氨酸培养的菌株内苦马豆素含量变化 | 第38-39页 |
| 3.3.3 培养基添加L-吡啶羧酸培养的菌株内苦马豆素含量变化 | 第39页 |
| 3.4 培养基添加α-氨基己二酸对内生真菌苦马豆素合成相关前体物影响 | 第39-43页 |
| 3.4.1 内生真菌中酵母氨酸含量变化 | 第39-41页 |
| 3.4.1.1 L-酵母氨酸标准品质谱 | 第39-41页 |
| 3.4.1.2 L-酵母氨酸含量 | 第41页 |
| 3.4.2 内生真菌中赖氨酸含量变化 | 第41-43页 |
| 3.4.2.1 L-赖氨酸标准品质谱 | 第41-43页 |
| 3.4.2.2 L-赖氨酸含量 | 第43页 |
| 3.5 酵母氨酸还原酶氨基酸序列的生物信息学分析 | 第43-51页 |
| 3.5.1 一级结构预测 | 第43-44页 |
| 3.5.2 信号肽预测 | 第44页 |
| 3.5.3 疏水性/亲水性分析 | 第44-45页 |
| 3.5.4 跨膜区域分析 | 第45-46页 |
| 3.5.5 氨基酸序列系统进化树 | 第46-49页 |
| 3.5.6 二级及三级结构的预测分析 | 第49-50页 |
| 3.5.7 固有无序化特征预测分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论与结论 | 第51-54页 |
| 4.1 讨论 | 第51-52页 |
| 4.1.1 小花棘豆Embellisia内生真菌酵母氨酸还原酶基因 | 第51页 |
| 4.1.2 培养条件对菌株内苦马豆素合成的影响 | 第51-52页 |
| 4.1.3 酵母氨酸还原酶生物信息学分析 | 第52页 |
| 4.2 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录1 | 第61-63页 |
| 附录2 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
