| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略表 | 第12-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-53页 |
| 1.1 驱动蛋白KIFC1在精子发生过程中功能的研究概况 | 第17-25页 |
| 1.1.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.1.2 精子发生 | 第18-21页 |
| 1.1.2.1 哺乳类精子发生 | 第18-19页 |
| 1.1.2.2 甲壳动物精子发生 | 第19-21页 |
| 1.1.3 精子发生中的细胞骨架结构 | 第21-22页 |
| 1.1.4 驱动蛋白在精子发生中的功能 | 第22-25页 |
| 1.2 泛素化与精子发生 | 第25-37页 |
| 1.2.1 泛素化 | 第25-26页 |
| 1.2.2 精子发生 | 第26-27页 |
| 1.2.3 精子发生过程中的泛素化 | 第27-33页 |
| 1.2.4 泛素化在顶体形成中的作用 | 第33-34页 |
| 1.2.5 精子在附睾中成熟过程中的泛素化 | 第34-35页 |
| 1.2.6 泛素化与睾丸癌的关系 | 第35-36页 |
| 1.2.7 结论与展望 | 第36-37页 |
| 1.3 参考文献 | 第37-53页 |
| 第二章 十足目游泳亚目秀丽白虾精子形成中的细胞骨架结构及动力学机制 | 第53-98页 |
| 2.1 引言 | 第53-55页 |
| 2.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第55页 |
| 2.2.2 主要试剂及仪器 | 第55-57页 |
| 2.3 实验方法 | 第57-73页 |
| 2.3.1 秀丽白虾KIFC1基因克隆 | 第57-63页 |
| 2.3.2 cDNA序列、多重比对、进化树构建以及蛋白结构分析 | 第63-64页 |
| 2.3.3 半定量PCR检测基因在各组织中的表达 | 第64页 |
| 2.3.4 原位杂交 | 第64-67页 |
| 2.3.5 原核表达 | 第67-70页 |
| 2.3.6 抗体制作及效价检验 | 第70页 |
| 2.3.7 免疫印迹 | 第70-72页 |
| 2.3.8 免疫荧光 | 第72-73页 |
| 2.4 实验结果 | 第73-90页 |
| 2.4.1 KIFC1序列分析 | 第73-76页 |
| 2.4.2 KIFC1蛋白序列比对和系统进化分析 | 第76-77页 |
| 2.4.3 KIFC1蛋白结构 | 第77-78页 |
| 2.4.4 Kifc1 mRNA在不同组织中的表达 | 第78-79页 |
| 2.4.5 精子形成中Kifc1基因的时空表达模式 | 第79-81页 |
| 2.4.6 秀丽白虾KIFC1蛋白体外表达和蛋白纯化结果 | 第81-82页 |
| 2.4.7 秀丽白虾KIFC1抗体效价检测结果 | 第82页 |
| 2.4.8 秀丽白虾KIFC1蛋白在各组织中的鉴定 | 第82页 |
| 2.4.9 秀丽白虾精子形成中KIFC1在细胞内的转运功能 | 第82-85页 |
| 2.4.10 大鼠精子形成中的微管套结构 | 第85-86页 |
| 2.4.11 KIFC1运输的“货物” | 第86-90页 |
| 2.5 讨论 | 第90-93页 |
| 2.5.1 顶体构架体与微管套的比较 | 第90-91页 |
| 2.5.2 KIFC1可能参与顶体发生和变形 | 第91-93页 |
| 2.6 本章小结 | 第93页 |
| 2.7 参考文献 | 第93-98页 |
| 第三章 中华绒螯蟹精子发生过程中p53基因功能探索 | 第98-126页 |
| 3.1 引言 | 第98-99页 |
| 3.2 实验材料 | 第99-101页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第99页 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 | 第99-101页 |
| 3.3 实验方法 | 第101-111页 |
| 3.3.1 中华绒螯蟹精巢p53基因克隆 | 第101-107页 |
| 3.3.2 cDNA序列、多重比对、进化树构建以及蛋白结构分析 | 第107-108页 |
| 3.3.3 半定量PCR检测基因在各组织中的表达 | 第108页 |
| 3.3.4 原位杂交 | 第108-111页 |
| 3.4 结果 | 第111-119页 |
| 3.4.1 P53序列分析 | 第111-112页 |
| 3.4.2 P53蛋白结构 | 第112-113页 |
| 3.4.3 P53蛋白序列比对和进化分析 | 第113-115页 |
| 3.4.4 P53 mRNA在不同组织中的表达 | 第115-116页 |
| 3.4.5 精子发生过程中P53的时空表达 | 第116-119页 |
| 3.5 讨论 | 第119-122页 |
| 3.5.1 p53蛋白的特性描述 | 第120页 |
| 3.5.2 p53 mRNA的组织表达 | 第120页 |
| 3.5.3 P53在保护正常精子发生中的潜在功能,包括引发DNA修复和细胞凋亡 | 第120-122页 |
| 3.5.4 p53在成熟精子中的潜在功能 | 第122页 |
| 3.6 结论 | 第122页 |
| 3.7 参考文献 | 第122-126页 |
| 第四章 中华绒螫蟹精子发生过程中PHB介导的线粒体泛素化研究 | 第126-169页 |
| 4.1 引言 | 第126-129页 |
| 4.2 实验材料 | 第129-130页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第129页 |
| 4.2.2 主要试剂及仪器 | 第129-130页 |
| 4.3 实验方法 | 第130-142页 |
| 4.3.1 原核表达 | 第130-133页 |
| 4.3.2 抗体制作及效化检验 | 第133-134页 |
| 4.3.3 免疫印迹 | 第134-136页 |
| 4.3.4 免疫荧光 | 第136-137页 |
| 4.3.5 体外转染 | 第137-142页 |
| 4.4 结果 | 第142-159页 |
| 4.4.1 重组载体构建 | 第142-143页 |
| 4.4.2 Pet28a-PHB重组蛋白纯化 | 第143页 |
| 4.4.3 抗体制备-抗体效价以及特异性检测 | 第143页 |
| 4.4.4 中华绒螯蟹PHB蛋白在不同组织中的鉴定 | 第143-144页 |
| 4.4.5 精巢中FK2(多聚泛素标记物)鉴定 | 第144-145页 |
| 4.4.6 PHB在中华绒螯蟹精子形成不同时期的表达情况 | 第145-146页 |
| 4.4.7 PHB与FK2在中华绒螯蟹精子形成不同时期的表达情况 | 第146-148页 |
| 4.4.8 线粒体标记物与FK2在中华绒螯蟹精子发生不同时期的表达情况 | 第148-151页 |
| 4.4.9 线粒体标记物与PHB在细胞中的定位对照 | 第151-152页 |
| 4.4.10 shPHB体外干扰 | 第152-154页 |
| 4.4.11 es-phb基因体外过表达实验 | 第154-155页 |
| 4.4.12 shPHB138干扰后线粒体、PHB泛素化水平检测 | 第155-158页 |
| 4.4.13 ES-PHB蛋白体外过表达对多聚泛素化的影响 | 第158-159页 |
| 4.5 讨论 | 第159-163页 |
| 4.5.1 PHB在甲壳动物精子顶体形成和细胞核形变中的作用 | 第160-161页 |
| 4.5.2 在精子形成时期PHB介导了线粒体的泛素化 | 第161-163页 |
| 4.6 本章小结 | 第163页 |
| 4.7 参考文献 | 第163-169页 |
| 第五章 总结与展望 | 第169-171页 |
| 附件Ⅰ | 第171-172页 |
| 附件Ⅱ | 第172-180页 |
| 附件Ⅲ | 第180-185页 |
