| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第12-13页 |
| 1.1.1 脂肪酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构与催化机制 | 第13页 |
| 1.2 疏棉状嗜热丝孢菌及其脂肪酶 | 第13-18页 |
| 1.2.1 疏棉状嗜热丝孢菌 | 第13-14页 |
| 1.2.2 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 | 第14-15页 |
| 1.2.3 棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在手性化合物制备中的应用 | 第15-18页 |
| 1.2.3.1 外消旋拆分 | 第15-16页 |
| 1.2.3.2 前手性酯不对称水解 | 第16-17页 |
| 1.2.3.3 其它应用 | 第17-18页 |
| 1.3 普瑞巴林 | 第18-21页 |
| 1.3.1 普瑞巴林简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 普瑞巴林的合成途径 | 第19-21页 |
| 1.4 本论文的选题意义及研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.1 本论文的选题意义 | 第21-22页 |
| 1.4.2 本论文的研究内容 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 Thermomyces lanuginosus ZJB09222脂肪酶基因的克隆及序列分析 | 第27-43页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1.1 菌种与质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 培养基与培养条件 | 第28页 |
| 2.2.1.3 工具酶及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.2.1 疏棉状嗜热丝孢菌总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 紫外检测RNA产率和纯度 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 RT-PCR扩增 | 第31-33页 |
| 2.2.2.4 电泳检测PCR产物 | 第33页 |
| 2.2.2.5 全长cDNA克隆 | 第33页 |
| 2.2.2.6 大肠杆菌E.coliJMI09感受态的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.2.7 目的基因的转化 | 第34页 |
| 2.2.2.8 菌落PCR | 第34页 |
| 2.2.2.9 重组质粒的抽提 | 第34-35页 |
| 2.2.2.10 脂肪酶基因全长序列的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-40页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.2 全长cDNA克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.3 cDNA序列分析 | 第37-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第三章 重组脂肪酶在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第43-59页 |
| 3.1 前言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1.1 实验菌株 | 第44页 |
| 3.2.1.2 培养基、工具酶及试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.1.3 实验仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.2 方法 | 第46-49页 |
| 3.2.2.1 表达引物的设计 | 第46页 |
| 3.2.2.2 TLL编码基因的分离 | 第46页 |
| 3.2.2.3 目的基因与表达载体的酶切 | 第46-47页 |
| 3.2.2.4 重组表达质粒的构建 | 第47页 |
| 3.2.2.5 阳性单克隆的筛选 | 第47页 |
| 3.2.2.6 诱导表达 | 第47页 |
| 3.2.2.7 表达产物SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 3.2.2.8 酶活测定 | 第48页 |
| 3.2.2.9 最佳诱导剂浓度 | 第48页 |
| 3.2.2.10 最佳诱导温度 | 第48页 |
| 3.2.2.11 最佳诱导时间 | 第48页 |
| 3.2.2.12 生物量的测定 | 第48页 |
| 3.2.2.13 重组菌的生长曲线 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-57页 |
| 3.3.1 重组菌的构建 | 第49-51页 |
| 3.3.2 重组菌表达条件优化 | 第51-57页 |
| 3.3.2.1 不同培养基的选择 | 第52-53页 |
| 3.3.2.2 诱导剂IPTG的用量 | 第53-54页 |
| 3.3.2.3 诱导温度 | 第54-55页 |
| 3.3.2.4 诱导时间 | 第55-56页 |
| 3.3.2.5 重组菌的生长曲线 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 第四章 重组菌全细胞催化制备(3S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的研究 | 第59-79页 |
| 4.1 前言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第60页 |
| 4.2.2 静息细胞的制备 | 第60页 |
| 4.2.3 静息细胞的转化 | 第60-61页 |
| 4.2.4 分析方法 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-76页 |
| 4.3.1 温度对静息细胞转化的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.2 pH对细胞转化的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.3 表面活性剂对细胞转化的影响 | 第64-66页 |
| 4.3.4 金属盐对细胞转化的影响 | 第66-70页 |
| 4.3.5 共溶剂对细胞转化的影响 | 第70-74页 |
| 4.3.5.1 有机共溶剂的选择 | 第70-71页 |
| 4.3.5.2 共溶剂添加浓度的选择 | 第71-73页 |
| 4.3.5.3 共溶剂预处理时间对重组脂肪酶稳定性的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.6 细胞浓度对酶活的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.7 底物浓度对酶活的影响 | 第75-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第五章 结论与展望 | 第79-82页 |
| 5.1 结论 | 第79-80页 |
| 5.2 展望 | 第80-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
