| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 双生病毒的发生情况与危害程度 | 第16页 |
| 1.2 双生病毒的分类和基因组结构 | 第16-20页 |
| 1.2.1 菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus) | 第18-19页 |
| 1.2.2 玉米线条病毒属(Mastrevirus) | 第19页 |
| 1.2.3 甜菜曲顶病毒属(Curtovirus) | 第19-20页 |
| 1.2.4 番茄伪曲顶病毒属(Topocuvirus) | 第20页 |
| 1.2.5 伊朗甜菜曲顶病毒属(Becurtovirus) | 第20页 |
| 1.2.6 芜菁曲顶病毒属(Turncurtovirus) | 第20页 |
| 1.2.7 弯叶画眉草条纹病毒属(Eragrovirus) | 第20页 |
| 1.3 菜豆金色花叶病毒属病毒betasatellite的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 双生病毒与RNA沉默 | 第21-28页 |
| 1.4.1 RNA沉默机制 | 第21-22页 |
| 1.4.2 RNA沉默途径中的抗病毒侵染的核心蛋白 | 第22-23页 |
| 1.4.3 双生病毒诱发的RNA沉默 | 第23-24页 |
| 1.4.4 双生病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第24-28页 |
| 1.5 基因沉默抑制子SGS3的研究进展 | 第28页 |
| 1.6 钙调素类似蛋白Rgs-CaM的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.7 本项目的研究目的和研究意义 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-49页 |
| 2.1 常规DNA克隆技术 | 第30-37页 |
| 2.1.1 PCR技术 | 第30-33页 |
| 2.1.2 PCR产物的回收 | 第33页 |
| 2.1.3 加A反应 | 第33-34页 |
| 2.1.4 连接 | 第34页 |
| 2.1.5 感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.1.6 转化 | 第35页 |
| 2.1.7 菌落PCR筛选 | 第35-36页 |
| 2.1.8 重组质粒的提取 | 第36页 |
| 2.1.9 重组质粒的酶切验证 | 第36-37页 |
| 2.1.10 重组克隆的测序鉴定 | 第37页 |
| 2.2 重组质粒导入根癌农杆菌及接种 | 第37-38页 |
| 2.2.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 2.2.2 重组质粒电击转化根癌农杆菌 | 第37-38页 |
| 2.2.3 农杆菌的浸润接种 | 第38页 |
| 2.3 植物总DNA提取以及Southern blot分析 | 第38-43页 |
| 2.3.1 CTAB法大量抽提植物DNA的方法 | 第38-40页 |
| 2.3.2 CTAB法小量抽提植物DNA的方法 | 第40页 |
| 2.3.3 Southern印迹分析 | 第40-43页 |
| 2.4 植物总RNA小量提取、RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交 | 第43-46页 |
| 2.4.1 植物总RNA的小量提取 | 第43-44页 |
| 2.4.2 反转录RT-PCR及RT-qPCR | 第44-45页 |
| 2.4.3 Northern印迹杂交 | 第45-46页 |
| 2.5 植物总蛋白的提取、蛋白的SDS-PAGE及Western blot杂交 | 第46-49页 |
| 2.5.1 植物总蛋白的提取 | 第46页 |
| 2.5.2 蛋白的SDS-PAGE | 第46-47页 |
| 2.5.3 Western blot分析技术 | 第47-49页 |
| 3 Nbrgs-CaM与NbSGS3互作结构域及Nbrgs-CaM抑制子结构域鉴定 | 第49-68页 |
| 3.1 材料与方法 | 第49-55页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 3.1.2 载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.1.3 农杆菌介导的浸润与接种 | 第51页 |
| 3.1.4 GFP荧光记录及样品采集 | 第51-52页 |
| 3.1.5 Western blot分析GFP蛋白的表达量 | 第52页 |
| 3.1.6 Northern blot分析 | 第52-55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-66页 |
| 3.2.1 ZF和2CC结构域对NbSGS3亚细胞定位很重要 | 第55-57页 |
| 3.2.2 ZF和2CC结构域对于NbSGS3与Nbrgs-CaM的互作很重要 | 第57-59页 |
| 3.2.3 EFⅠ和EFⅡ是Nbrgs-CaM与NbSGS3的互作结构域 | 第59-61页 |
| 3.2.4 在野生型本氏烟中鉴定Nbrgs-CaM缺失突变体的抑制子活性 | 第61-63页 |
| 3.2.5 在16C本氏烟中鉴定Nbrgs-CaM缺失突变体的抑制子活性 | 第63-65页 |
| 3.2.6 Nbrgs-CaM蛋白介导NbSGS3蛋白的降解 | 第65-66页 |
| 3.3 讨论 | 第66-68页 |
| 4 全文小结 | 第68-69页 |
| 附文 TYLCCNB编码的pC1蛋白与NbPsbP的互作机理研究 | 第69-90页 |
| 1 绪论 | 第69-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-75页 |
| 2.1 实验材料 | 第71页 |
| 2.2 NbPsbP沉默载体的构建 | 第71-72页 |
| 2.3 常温包埋样品制备以及电镜观察细胞结构 | 第72页 |
| 2.4 双分子荧光互补实验(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC) | 第72-73页 |
| 2.4.1 重组质粒电击转化农杆菌 | 第72页 |
| 2.4.2 农杆菌接种 | 第72-73页 |
| 2.4.3 激光共聚焦显微镜观察互作结果 | 第73页 |
| 2.5 酵母双杂交实验 | 第73-74页 |
| 2.5.1 酵母双杂交验证两种已知蛋白的互作 | 第73-74页 |
| 2.5.2 酵母蛋白的提取 | 第74页 |
| 2.6 NbPsbP总蛋白的提取及Western blot | 第74页 |
| 2.7 NbPsbP总RNA提取、RT-PCR、RT-qPCR及Northern blot | 第74-75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-90页 |
| 3.1 TYLCCNB编码的βC1蛋白可以引起本氏烟叶绿体变形 | 第75-77页 |
| 3.2 TYLCCNB编码的βC1蛋白与NbPsbP蛋白互作 | 第77-81页 |
| 3.2.1 BiFC验证βCl蛋白与NbPsbP蛋白的互作 | 第77-79页 |
| 3.2.2 酵母双杂交验证pC1蛋白与NbPsbP蛋白的互作 | 第79-81页 |
| 3.3 NbPsbP定位于叶绿体 | 第81-83页 |
| 3.4 双生病毒10Aβ的侵染显著上调NbPsbP mRNA的表达量 | 第83-84页 |
| 3.5 βC1转基因本氏烟中NbPsbP mRNA表达量上调 | 第84-85页 |
| 3.6 NbPsbP基因对10Aβ病毒致病性的影响 | 第85-88页 |
| 3.6.1 NbPsbP基因沉默表型和沉默水平 | 第85-86页 |
| 3.6.2 沉默NbPsbP基因会减轻10Aβ症状并减少病毒的积累量 | 第86-88页 |
| 3.7 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 附录A：本论文所用缩写词及中英文对照 | 第97-99页 |
| 附录B：本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第99-100页 |
| 附录C：常用缓冲液及培养基配方 | 第100-105页 |
