| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 脂肪酶的简介 | 第13页 |
| 1.2 脂肪酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.1 脂肪酶在医药工业中的应用 | 第13页 |
| 1.2.2 脂肪酶在食品工业中的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 脂肪酶在其他工业中的应用 | 第14页 |
| 1.3 脂肪酶的结构特征和催化机理 | 第14-16页 |
| 1.3.1 脂肪酶的空间结构特征 | 第14-15页 |
| 1.3.2 脂肪酶的催化机制 | 第15-16页 |
| 1.4 脂肪酶的稳定性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 影响脂肪酶稳定性的因素 | 第16-18页 |
| 1.4.1.1 氢键 | 第16-17页 |
| 1.4.1.2 二硫键 | 第17页 |
| 1.4.1.3 疏水相互作用 | 第17页 |
| 1.4.1.4 金属离子结合 | 第17页 |
| 1.4.1.5 静电相互作用 | 第17-18页 |
| 1.4.2 提高脂肪酶稳定性的方法 | 第18页 |
| 1.5 脂肪酶的底物选择性 | 第18-19页 |
| 1.6 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 脂肪酶MAS1的纯化和结晶条件的筛选 | 第21-27页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料和仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.3.1 脂肪酶MAS1的纯化 | 第23页 |
| 2.3.2 蛋白质浓度的测定 | 第23页 |
| 2.3.3 脂肪酶MAS1结晶条件的筛选 | 第23-24页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第24-26页 |
| 2.4.1 脂肪酶MAS1的纯化 | 第24-25页 |
| 2.4.2 脂肪酶MAS1结晶条件的筛选 | 第25-26页 |
| 2.5 本章小结 | 第26-27页 |
| 第三章 脂肪酶MAS1的晶体结构解析 | 第27-35页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 材料和仪器 | 第27页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第27页 |
| 3.2.2 溶液配制 | 第27页 |
| 3.3 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.3.1 脂肪酶MAS1衍射数据的收集 | 第27-28页 |
| 3.3.2 脂肪酶MAS1衍射数据的处理 | 第28页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第28-33页 |
| 3.4.1 脂肪酶MAS1的整体结构 | 第28-30页 |
| 3.4.2 脂肪酶MAS1的盖子区 | 第30-32页 |
| 3.4.3 脂肪酶MAS1与其他脂肪酶的比较 | 第32-33页 |
| 3.5 本章小结 | 第33-35页 |
| 第四章 脂肪酶MAS1的热稳定机制 | 第35-50页 |
| 4.1 引言 | 第35页 |
| 4.2 材料和仪器 | 第35-36页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第35页 |
| 4.2.2 试剂 | 第35页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 4.2.4 溶液配制 | 第36页 |
| 4.3 试验方法 | 第36-41页 |
| 4.3.1 分子动力学模拟 | 第36-37页 |
| 4.3.2 MAS1突变体的构建 | 第37-38页 |
| 4.3.3 MAS1突变体表达菌株的构建 | 第38-39页 |
| 4.3.4 MAS1突变体的表达与纯化 | 第39-40页 |
| 4.3.5 脂肪酶活力的测定 | 第40页 |
| 4.3.6 酶活与OD_(405)标准曲线的制作 | 第40页 |
| 4.3.7 MAS1及其突变体热稳定性 | 第40-41页 |
| 4.3.7.1 热失活实验 | 第40-41页 |
| 4.3.7.2 熔解温度的测定 | 第41页 |
| 4.3.8 MAS1金属离子的螯合及结合 | 第41页 |
| 4.4 实验结果 | 第41-49页 |
| 4.4.1 热稳定脂肪酶MAS1 | 第41-42页 |
| 4.4.2 分子动力学模拟分析 | 第42-44页 |
| 4.4.3 突变体的构建和表达纯化 | 第44-45页 |
| 4.4.4 热稳定性分析 | 第45-49页 |
| 4.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 脂肪酶MAS1位置选择性机制 | 第50-62页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 材料和仪器 | 第50-51页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第50页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第50页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第50-51页 |
| 5.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 5.3.1 脂肪酶MAS1突变体的构建及表达、纯化 | 第51页 |
| 5.3.2 橄榄油水解活力的测定 | 第51页 |
| 5.3.3 MAS1及其突变体位置选着性的测定 | 第51-52页 |
| 5.3.4 同源建模与分子对接 | 第52页 |
| 5.3.4.1 同源建模 | 第52页 |
| 5.3.4.2 分子对接 | 第52页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第52-60页 |
| 5.4.1 影响MAS1位置选择性的关键位点选择 | 第52-54页 |
| 5.4.2 引物设计及突变体构建、表达和纯化 | 第54页 |
| 5.4.3 橄榄油乳化法测定酶活 | 第54-55页 |
| 5.4.4 MAS1及其突变体位置选择性的测定 | 第55-60页 |
| 5.5 本章小结 | 第60-62页 |
| 结论与展望 | 第62-65页 |
| 一、结论 | 第62-63页 |
| 二、创新点 | 第63页 |
| 三、展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附件 | 第78页 |