| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 异戊二烯概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 异戊二烯的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 异戊二烯的工业应用前景 | 第10-11页 |
| 1.2 异戊二烯的生产现状 | 第11-12页 |
| 1.2.1 C_5馏分分离法 | 第11页 |
| 1.2.2 脱氢法 | 第11-12页 |
| 1.2.3 化学合成法 | 第12页 |
| 1.3 异戊二烯生物合成方法研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3.1 MEP途径研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.2 MVA途径研究进展 | 第15页 |
| 1.4 工程大肠杆菌发酵过程中影响因素的研究 | 第15-17页 |
| 1.4.1 培养基成分影响 | 第15页 |
| 1.4.2 种子质量的影响 | 第15-16页 |
| 1.4.3 温度影响 | 第16页 |
| 1.4.4 pH影响 | 第16页 |
| 1.4.5 诱导剂影响 | 第16页 |
| 1.4.6 乙酸的影响 | 第16-17页 |
| 1.5 无细胞合成生物技术 | 第17-21页 |
| 1.5.1 无细胞合成生物技术研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5.2 无细胞合成生物技术的应用 | 第18-19页 |
| 1.5.3 生物积块与模块的构建 | 第19-20页 |
| 1.5.4 无细胞合成生物技术面临挑战 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题研究意义与研究内容 | 第21-24页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第21-22页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第22-24页 |
| 2 大肠杆菌突变菌株构建—乙醇脱氢酶基因（adhE）与乙酸激酶基因（ackA）敲除 | 第24-40页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 引物 | 第25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.5 培养基 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 敲除乙醇脱氢酶基因（adhE） | 第26-33页 |
| 2.3.2 敲除乙酸激酶基因（ackA） | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.4.1 敲除乙醇脱氢酶基因（adhE） | 第34-37页 |
| 2.4.2 敲除乙酸激酶基因（ackA） | 第37-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 3 异戊二烯与乳酸摇瓶发酵研究 | 第40-52页 |
| 3.1 前言 | 第40-41页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.4 培养基及其它溶液 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.3.1 获取原料甲羟戊酸 | 第42-44页 |
| 3.3.2 摇瓶实验验证基因敲除菌株的优势 | 第44-45页 |
| 3.3.3 摇瓶发酵培养基的筛选 | 第45页 |
| 3.3.4 pH调节方式对摇瓶发酵培养的影响 | 第45页 |
| 3.3.5 诱导剂浓度对摇瓶发酵培养的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.6 产物检测方法的建立 | 第46-47页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第47-51页 |
| 3.4.1 异戊二烯标准曲线 | 第47-48页 |
| 3.4.2 摇瓶对照实验验证基因敲除菌株的优势 | 第48页 |
| 3.4.3 摇瓶发酵培养基的筛选 | 第48-49页 |
| 3.4.4 pH调节方式的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.5 诱导剂浓度的影响 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 4 MVA下游途径体外酶法研究 | 第52-66页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第53-55页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.2.4 培养基 | 第54页 |
| 4.2.5 缓冲液及其它溶液 | 第54-55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 4.3.1 MVA途径下游五个酶的纯化 | 第55-57页 |
| 4.3.2 MVA途径下游五个酶体外反应 | 第57-60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-65页 |
| 4.4.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第60-61页 |
| 4.4.2 选择反应底物甲羟戊酸和ATP最适浓度 | 第61-63页 |
| 4.4.3 单个酶浓度对体外反应异戊二烯生成的影响 | 第63页 |
| 4.4.4 MVA下游五个酶比例调整与与用量相同时产异戊二烯比较 | 第63-64页 |
| 4.4.5 体外反应与胞内产异戊二烯比较 | 第64-65页 |
| 4.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第74-75页 |
