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产异戊二烯工程菌的代谢工程改造及体外酶法合成研究

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
1 文献综述第10-24页
    1.1 异戊二烯概述第10-11页
        1.1.1 异戊二烯的理化性质第10页
        1.1.2 异戊二烯的工业应用前景第10-11页
    1.2 异戊二烯的生产现状第11-12页
        1.2.1 C_5馏分分离法第11页
        1.2.2 脱氢法第11-12页
        1.2.3 化学合成法第12页
    1.3 异戊二烯生物合成方法研究进展第12-15页
        1.3.1 MEP途径研究进展第14-15页
        1.3.2 MVA途径研究进展第15页
    1.4 工程大肠杆菌发酵过程中影响因素的研究第15-17页
        1.4.1 培养基成分影响第15页
        1.4.2 种子质量的影响第15-16页
        1.4.3 温度影响第16页
        1.4.4 pH影响第16页
        1.4.5 诱导剂影响第16页
        1.4.6 乙酸的影响第16-17页
    1.5 无细胞合成生物技术第17-21页
        1.5.1 无细胞合成生物技术研究进展第17-18页
        1.5.2 无细胞合成生物技术的应用第18-19页
        1.5.3 生物积块与模块的构建第19-20页
        1.5.4 无细胞合成生物技术面临挑战第20-21页
    1.6 本课题研究意义与研究内容第21-24页
        1.6.1 研究意义第21-22页
        1.6.2 研究内容第22-24页
2 大肠杆菌突变菌株构建—乙醇脱氢酶基因(adhE)与乙酸激酶基因(ackA)敲除第24-40页
    2.1 前言第24-25页
    2.2 实验材料与仪器第25-26页
        2.2.1 菌株和质粒第25页
        2.2.2 引物第25页
        2.2.3 主要试剂第25-26页
        2.2.4 主要仪器第26页
        2.2.5 培养基第26页
    2.3 实验方法第26-34页
        2.3.1 敲除乙醇脱氢酶基因(adhE)第26-33页
        2.3.2 敲除乙酸激酶基因(ackA)第33-34页
    2.4 结果与讨论第34-39页
        2.4.1 敲除乙醇脱氢酶基因(adhE)第34-37页
        2.4.2 敲除乙酸激酶基因(ackA)第37-39页
    2.5 本章小结第39-40页
3 异戊二烯与乳酸摇瓶发酵研究第40-52页
    3.1 前言第40-41页
    3.2 实验材料与仪器第41-42页
        3.2.1 菌株和质粒第41页
        3.2.2 主要试剂第41页
        3.2.3 主要仪器第41-42页
        3.2.4 培养基及其它溶液第42页
    3.3 实验方法第42-47页
        3.3.1 获取原料甲羟戊酸第42-44页
        3.3.2 摇瓶实验验证基因敲除菌株的优势第44-45页
        3.3.3 摇瓶发酵培养基的筛选第45页
        3.3.4 pH调节方式对摇瓶发酵培养的影响第45页
        3.3.5 诱导剂浓度对摇瓶发酵培养的影响第45-46页
        3.3.6 产物检测方法的建立第46-47页
    3.4 实验结果与讨论第47-51页
        3.4.1 异戊二烯标准曲线第47-48页
        3.4.2 摇瓶对照实验验证基因敲除菌株的优势第48页
        3.4.3 摇瓶发酵培养基的筛选第48-49页
        3.4.4 pH调节方式的影响第49-50页
        3.4.5 诱导剂浓度的影响第50-51页
    3.5 本章小结第51-52页
4 MVA下游途径体外酶法研究第52-66页
    4.1 前言第52-53页
    4.2 实验材料与仪器第53-55页
        4.2.1 菌株和质粒第53页
        4.2.2 主要试剂第53页
        4.2.3 主要仪器第53-54页
        4.2.4 培养基第54页
        4.2.5 缓冲液及其它溶液第54-55页
    4.3 实验方法第55-60页
        4.3.1 MVA途径下游五个酶的纯化第55-57页
        4.3.2 MVA途径下游五个酶体外反应第57-60页
    4.4 结果与讨论第60-65页
        4.4.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第60-61页
        4.4.2 选择反应底物甲羟戊酸和ATP最适浓度第61-63页
        4.4.3 单个酶浓度对体外反应异戊二烯生成的影响第63页
        4.4.4 MVA下游五个酶比例调整与与用量相同时产异戊二烯比较第63-64页
        4.4.5 体外反应与胞内产异戊二烯比较第64-65页
    4.5 本章小结第65-66页
结论第66-68页
参考文献第68-72页
致谢第72-74页
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录第74-75页

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