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CRP-286位SNP影响表达的机制研究

中文摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 前言第7-21页
    1.1 C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)简介第7-8页
        1.1.1 发现历史第7-8页
        1.1.2 CRP的结构和生理功能第8页
    1.2 DNA甲基化第8-14页
        1.2.1 DNA甲基化简介第9页
        1.2.2 DNA甲基化反应机制第9-10页
        1.2.3 真核生物的DNA甲基化第10-11页
        1.2.4 DNA甲基化导致基因沉默第11-12页
        1.2.5 哺乳动物的DNA甲基化及甲基转移酶第12-14页
    1.3 DNA去甲基化第14-17页
        1.3.1 DNA主动和被动去甲基化第14-15页
        1.3.2 哺乳动物中的DNA去甲基化第15页
        1.3.3 DNA主动去甲基化的机制研究第15-16页
        1.3.4 TET双加氧酶第16-17页
    1.4 CRISPR-Cas9第17-21页
        1.4.1 CRISPR-Cas9的发现及研究进展第17-19页
        1.4.2CRISPR-Cas9的原理第19-21页
第二章 材料与方法第21-31页
    2.1 细胞、兔组织材料第21页
        2.1.1 细胞培养条件第21页
        2.1.2 兔组织材料第21页
    2.2 提取RNA及反转录第21页
    2.3 各种PCR体系第21-24页
        2.3.1 普通PCR第21-23页
        2.3.2 克隆基因第23页
        2.3.3 半定量Realtime PCR第23-24页
    2.4 DNA甲基化的检测方法第24页
    2.5 DNA去甲基化的检测第24-25页
    2.6 人工核酸内切酶CRISPR-Cas9技术第25-30页
        2.6.1 设计sgRNA第25-26页
        2.6.2 构建crispr-gRNA载体第26-28页
        2.6.3 Oligo的设计第28页
        2.6.4 分离克隆细胞系(稀释法)第28-30页
    2.7 荧光素酶报告基因实验第30-31页
第三章 结果分析与讨论第31-45页
    3.1 细胞系甲基化水平的定量检测第31-33页
    3.2 兔组织甲基化水平的定量检测第33-35页
    3.3 Hep 3B细胞系去甲基化定量检测第35-37页
    3.4 兔肝脏去甲基化定量检测第37-38页
    3.5 CRP表达模式第38-40页
    3.6 启动子区域SNP位点对转录的影响第40-43页
    3.7 CRP启动子-286 位点定点突变第43-45页
第四章 结论第45-47页
第五章 展望第47-48页
参考文献第48-56页
致谢第56页

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