中文摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
第一章 前言 | 第7-21页 |
1.1 C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)简介 | 第7-8页 |
1.1.1 发现历史 | 第7-8页 |
1.1.2 CRP的结构和生理功能 | 第8页 |
1.2 DNA甲基化 | 第8-14页 |
1.2.1 DNA甲基化简介 | 第9页 |
1.2.2 DNA甲基化反应机制 | 第9-10页 |
1.2.3 真核生物的DNA甲基化 | 第10-11页 |
1.2.4 DNA甲基化导致基因沉默 | 第11-12页 |
1.2.5 哺乳动物的DNA甲基化及甲基转移酶 | 第12-14页 |
1.3 DNA去甲基化 | 第14-17页 |
1.3.1 DNA主动和被动去甲基化 | 第14-15页 |
1.3.2 哺乳动物中的DNA去甲基化 | 第15页 |
1.3.3 DNA主动去甲基化的机制研究 | 第15-16页 |
1.3.4 TET双加氧酶 | 第16-17页 |
1.4 CRISPR-Cas9 | 第17-21页 |
1.4.1 CRISPR-Cas9的发现及研究进展 | 第17-19页 |
1.4.2CRISPR-Cas9的原理 | 第19-21页 |
第二章 材料与方法 | 第21-31页 |
2.1 细胞、兔组织材料 | 第21页 |
2.1.1 细胞培养条件 | 第21页 |
2.1.2 兔组织材料 | 第21页 |
2.2 提取RNA及反转录 | 第21页 |
2.3 各种PCR体系 | 第21-24页 |
2.3.1 普通PCR | 第21-23页 |
2.3.2 克隆基因 | 第23页 |
2.3.3 半定量Realtime PCR | 第23-24页 |
2.4 DNA甲基化的检测方法 | 第24页 |
2.5 DNA去甲基化的检测 | 第24-25页 |
2.6 人工核酸内切酶CRISPR-Cas9技术 | 第25-30页 |
2.6.1 设计sgRNA | 第25-26页 |
2.6.2 构建crispr-gRNA载体 | 第26-28页 |
2.6.3 Oligo的设计 | 第28页 |
2.6.4 分离克隆细胞系(稀释法) | 第28-30页 |
2.7 荧光素酶报告基因实验 | 第30-31页 |
第三章 结果分析与讨论 | 第31-45页 |
3.1 细胞系甲基化水平的定量检测 | 第31-33页 |
3.2 兔组织甲基化水平的定量检测 | 第33-35页 |
3.3 Hep 3B细胞系去甲基化定量检测 | 第35-37页 |
3.4 兔肝脏去甲基化定量检测 | 第37-38页 |
3.5 CRP表达模式 | 第38-40页 |
3.6 启动子区域SNP位点对转录的影响 | 第40-43页 |
3.7 CRP启动子-286 位点定点突变 | 第43-45页 |
第四章 结论 | 第45-47页 |
第五章 展望 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-56页 |
致谢 | 第56页 |