| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 蚯蚓血红蛋白MSMEG_3312在分枝杆菌抗药性中的功能和作用机制 | 第12-25页 |
| 第1章 前言 | 第12-14页 |
| 1.1 蚯蚓血红蛋白的研究进展 | 第12页 |
| 1.2 耻垢分枝杆菌中蚯蚓血红蛋白的研究意义 | 第12-14页 |
| 1.2.1 模式菌株--耻垢分枝杆菌 | 第12-13页 |
| 1.2.2 活性氧与细菌耐药 | 第13-14页 |
| 1.2.3 耻垢分枝杆菌蚯蚓血红蛋白的研究意义 | 第14页 |
| 第2章 MSMEG_3312功能研究 | 第14-23页 |
| 2.1 引言 | 第14-15页 |
| 2.2 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第15-16页 |
| 2.2.2 实验试剂及主要试剂配制方法 | 第16-17页 |
| 2.2.3 实验用菌株 | 第17页 |
| 2.3 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.3.1 药敏试验 | 第17-18页 |
| 2.3.2 生长曲线测定 | 第18页 |
| 2.3.3 平板耐受实验 | 第18页 |
| 2.3.4 启动子表达测定结果分析 | 第18-19页 |
| 2.4 结果与分析 | 第19-23页 |
| 2.4.1 药敏试验 | 第19-21页 |
| 2.4.2 生长曲线测定 | 第21-22页 |
| 2.4.3 平板耐受实验 | 第22页 |
| 2.4.4 启动子表达测定结果分析 | 第22-23页 |
| 第3章 小结 | 第23-25页 |
| 第二部分 广谱胁迫蛋白Rv1996调节结核分枝杆菌对INH敏感性的机制研究 | 第25-50页 |
| 第1章 前言 | 第25-29页 |
| 1.1 广谱胁迫蛋白的研究进展以及结核分枝杆菌中广谱胁迫蛋白的研究意义 | 第25-27页 |
| 1.2 M-PFC系统 | 第27-28页 |
| 1.3 异烟肼 | 第28-29页 |
| 第2章 Rv1996功能的研究 | 第29-49页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验试剂及主要试剂配制方法 | 第31-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-42页 |
| 2.3.1 野生型与过表达菌株对药物的表型鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 rv1996启动子参与的胁迫的反应 | 第35-36页 |
| 2.3.2.1 rv1996启动子在各个时期的表达 | 第35页 |
| 2.3.2.2 药物胁迫模型的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.3 过表达影响菌株的过氧化氢酶和过氧化物酶活性 | 第36-38页 |
| 2.3.3.1 乙硫异烟胺(ethionamide,ETH)的MIC测定 | 第36页 |
| 2.3.3.2 过氧化氢酶过氧化物酶活性的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.3.3 NBT染色 | 第37-38页 |
| 2.3.4 质谱分析 | 第38页 |
| 2.3.5 RT-PCR | 第38-39页 |
| 2.3.5.1 RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.3.5.2 cDNA合成 | 第39页 |
| 2.3.5.3 Real Time PCR | 第39页 |
| 2.3.6 利用M-PFC (mycobacterial protein fragmentcomplementation)系统检测Rv1996与KatG是否有相互作用 | 第39-42页 |
| 2.3.6.1 共转菌株的构建 | 第39-42页 |
| 2.3.6.1.1 大肠感受态的制备 | 第39页 |
| 2.3.6.1.2 M.smegmatis感受态的制备 | 第39-40页 |
| 2.3.6.1.3 pUAB100、pUAB200、pUAB300、pUAB400载体信息 | 第40页 |
| 2.3.6.1.4 构建共转菌 | 第40-42页 |
| 2.4 结果与分析 | 第42-49页 |
| 2.4.1 Rv1996过表达菌株对药物胁迫的响应 | 第42-43页 |
| 2.4.2 rv1996启动子参与的胁迫的反应 | 第43-45页 |
| 2.4.2.1 rv1996启动子在各个时期的表达 | 第43-44页 |
| 2.4.2.2 药物胁迫模型中rv1996启动子的表达 | 第44-45页 |
| 2.4.3 过表达影响菌株的过氧化氢酶和过氧化物酶活性 | 第45-47页 |
| 2.4.3.1 ETH的MIC | 第45-46页 |
| 2.4.3.2 过氧化氢酶过氧化物酶活性的测定 | 第46-47页 |
| 2.4.3.3 NBT还原实验 | 第47页 |
| 2.4.4 质谱发现KatG与Rv1996共同存在 | 第47-48页 |
| 2.4.5 RT-PCR | 第48页 |
| 2.4.6 KatG与Rv1996的相互作用 | 第48-49页 |
| 2.4.6.1 细菌双杂交结果 | 第48-49页 |
| 第3章 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
