| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号说明 | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-29页 |
| 1 哮喘的免疫学 | 第19-20页 |
| 1.1 哮喘与淋巴细胞 | 第19页 |
| 1.2 哮喘与活化T淋巴细胞核因子(NFAT) | 第19-20页 |
| 2 肝素及其衍生物在哮喘治疗中的作用 | 第20-25页 |
| 2.1 肝素与白介素的分泌 | 第21-22页 |
| 2.2 肝素与NFAT | 第22-23页 |
| 2.3 肝素和IP_3受体(IP_3R) | 第23-25页 |
| 2.3.1 IP_3R结合核心(IP_3Rcore)的分子结构 | 第23-24页 |
| 2.3.2 肝素及其衍生物寡糖结构和IP_3Rcore的契合 | 第24-25页 |
| 3 肝素的降解方法 | 第25-27页 |
| 3.1 亚硝酸控制解聚法 | 第26页 |
| 3.2 β-消除降解法 | 第26页 |
| 3.3 过氧化氢降解法 | 第26页 |
| 3.4 其它制备LMWH的方法 | 第26-27页 |
| 3.5 几种降解方法的比较 | 第27页 |
| 4 本课题已有的研究基础 | 第27页 |
| 5 本课题拟解决的问题 | 第27-29页 |
| 第二章 低分子肝素(LMWH)和低分子多硫酸肝素(LPSH)的制备及其寡糖的分离纯化 | 第29-44页 |
| 1 材料 | 第29页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第29页 |
| 1.2 仪器 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| 2.1 磺化法制备PSHP与LPSH | 第29-30页 |
| 2.2 降解法制各LPSH | 第30-32页 |
| 2.2.1 β消除降解法 | 第30-31页 |
| 2.2.2 亚硝酸降解法 | 第31页 |
| 2.2.3 过氧化氢降解法 | 第31-32页 |
| 2.3 Superdex 30凝胶层析 | 第32-33页 |
| 2.4 Qff离子交换层析分离肝素寡糖 | 第33页 |
| 2.5 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳 | 第33-34页 |
| 2.5.1 缓冲液的配制 | 第33-34页 |
| 2.5.2 PAGE凝胶的制备 | 第34页 |
| 2.5.3 电泳 | 第34页 |
| 2.5.4 染色与脱色 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| 3.1 LMWH寡糖分离纯化的结果 | 第34-36页 |
| 3.1.1 SuperDex 30分离LMWH寡糖的结果 | 第34-35页 |
| 3.1.2 SuperDex 30第二次分离LMWH寡糖的结果 | 第35-36页 |
| 3.1.3 Qff分离LMWH寡糖的结果 | 第36页 |
| 3.2 PSHP降解产物凝胶过滤层析分离结果 | 第36-40页 |
| 3.2.1 LPSH-SO经Superdex 30凝胶拄层析分离结果 | 第36-37页 |
| 3.2.2 LPSH-BH经Superdex 30凝胶拄层析分离结果 | 第37页 |
| 3.2.3 LPSH-NO经Superdex 30凝胶拄层析分离结果 | 第37-38页 |
| 3.2.4 LPSH-HO经Superdex 30凝胶拄层析分离结果 | 第38-40页 |
| 3.3 PAGE电泳的结果 | 第40-42页 |
| 3.3.1 LMWH分离结果 | 第40-41页 |
| 3.3.2 PSHP降解结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 低分子肝素和低分子多硫酸肝素的结构研究 | 第44-78页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| 1.1 试剂 | 第44页 |
| 1.2 仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-45页 |
| 2.1 紫外扫描测定 | 第44页 |
| 2.2 红外光谱测定 | 第44页 |
| 2.3 MS测定 | 第44-45页 |
| 2.4 核磁共振图谱测定 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-55页 |
| 3.1 紫外扫描测定结果 | 第45-46页 |
| 3.2 红外光谱测定结果 | 第46-47页 |
| 3.3 MS测定结果 | 第47-51页 |
| 3.4 核磁共振图谱测定结果 | 第51-55页 |
| 3.4.1 LMWH8-1、LPSH-3、LPSH-4的~(13)C-NMR图谱 | 第51-52页 |
| 3.4.2 LMWH8-1、LPSH-3、LPSH-4的~1H-NMR图谱 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 附图 | 第57-78页 |
| 第四章 多硫酸肝素寡糖和肝素寡糖对哮喘小鼠MIL-4、MIL-5、MIL-13基因转录的调节 | 第78-96页 |
| 1 材料 | 第78页 |
| 1.1 试剂 | 第78页 |
| 1.2 仪器 | 第78页 |
| 1.3 动物 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-87页 |
| 2.1 建立小鼠哮喘模型 | 第78-79页 |
| 2.2 脾细胞总RNA的提取、检测和逆转录 | 第79-80页 |
| 2.2.1 总RNA的提取： | 第79页 |
| 2.2.2 mRNA的紫外检测及琼脂糖电泳 | 第79-80页 |
| 2.2.3 目的基因及内参照基因的逆转录 | 第80页 |
| 2.3 目的基因和内参照基因cDNA的PCR条件 | 第80-85页 |
| 2.3.1 目的基因及内参照基因的引物设计与合成 | 第80-84页 |
| 2.3.2 不同基因引物最适退火温度的选择 | 第84页 |
| 2.3.3 目的基因及内参照基因的PCR扩增 | 第84-85页 |
| 2.4 目的基因及内参照基因的荧光定量PCR | 第85-87页 |
| 2.4.1 Quant SYBR Green PCR Kit的反应体系 | 第85页 |
| 2.4.2 PCR扩增程序 | 第85-86页 |
| 2.4.3 荧光定量PCR相对定量检测计算方法 | 第86-87页 |
| 3 结果 | 第87-92页 |
| 3.1 RNA提取的结果 | 第87-88页 |
| 3.1.1 RNA电泳结果 | 第87页 |
| 3.1.2 RNA紫外检测部分结果见表5-6。 | 第87-88页 |
| 3.2 温度梯度摸索结果 | 第88-89页 |
| 3.3 荧光定量PCR结果 | 第89-92页 |
| 3.3.1 mIL-4荧光定量PCR结果 | 第89-91页 |
| 3.3.2 mIL-5荧光定量PCR结果 | 第91-92页 |
| 3.3.3 mIL-13荧光定量PCR结果 | 第92页 |
| 4 讨论 | 第92-96页 |
| 第五章 多硫酸肝素寡糖和肝素寡糖对哮喘小鼠核转录因子NFAT的影响 | 第96-107页 |
| 1 材料 | 第96页 |
| 1.1 试剂 | 第96页 |
| 1.2 仪器 | 第96页 |
| 1.3 动物 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-99页 |
| 2.1 建立小鼠哮喘模型 | 第96-97页 |
| 2.2 肺组织切片的制备 | 第97-98页 |
| 2.2.1 肺组织的分离与固定 | 第97页 |
| 2.2.2 组织脱水 | 第97页 |
| 2.2.3 组织透明 | 第97页 |
| 2.2.4 组织浸蜡 | 第97页 |
| 2.2.5 组织包埋 | 第97页 |
| 2.2.6 处理玻片 | 第97-98页 |
| 2.2.7 组织切片 | 第98页 |
| 2.3 小鼠肺组织NFATp阳性率测定 | 第98-99页 |
| 2.3.1 石蜡切片脱蜡至水 | 第98页 |
| 2.3.2 SP法测定NFATp阳性率 | 第98-99页 |
| 3 结果 | 第99-102页 |
| 3.1 NFATp在小鼠肺组织中表达的测定结果 | 第99-102页 |
| 3.1.1 NFATp在各组小鼠肺组织的表达 | 第99页 |
| 3.1.2 NFATp表达阳性率测定结果 | 第99-102页 |
| 4 讨论 | 第102-107页 |
| 论文总结与创新 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第120-121页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第121页 |
