基因芯片联合共检三种仔猪腹泻病毒方法的优化及应用
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩写说明 | 第11-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-30页 |
| 1 基因芯片概述 | 第16-18页 |
| 1.1 基因芯片原理 | 第16页 |
| 1.2 基因芯片技术路线 | 第16页 |
| 1.3 检测芯片在诊断畜禽疾病中的相关应用 | 第16-18页 |
| 2 不对称PCR概述 | 第18-21页 |
| 2.1 不对称PCR原理 | 第18页 |
| 2.2 不对称PCR分类 | 第18-20页 |
| 2.3 不对称PCR相关应用 | 第20-21页 |
| 3 猪传染性胃肠炎病毒概述 | 第21-24页 |
| 3.1 传染性胃肠炎病毒生物学特性 | 第21页 |
| 3.2 传染性胃肠炎病毒相关检测技术 | 第21-24页 |
| 4 轮状病毒概述 | 第24-26页 |
| 4.1 轮状病毒生物学特性 | 第24-25页 |
| 4.2 轮状病毒相关生物检测技术 | 第25-26页 |
| 5 猪流行性腹泻病毒概述 | 第26-28页 |
| 5.1 猪流行性腹泻病毒生物学特性 | 第27页 |
| 5.2 流行性腹泻病毒相关检测技术 | 第27-28页 |
| 6 研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二部分 试验研究 | 第30-70页 |
| 第一章 探针基因质量控制 | 第30-41页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 探针相关重组质粒、定位基因及引物 | 第30-31页 |
| 1.2 芯片相关材料 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1 探针及定位基因的制备 | 第32页 |
| 2.2 点样液的选择 | 第32页 |
| 2.3 水合时间的选择 | 第32-33页 |
| 2.4 洗液及干燥方式的选择 | 第33页 |
| 2.5 探针基因浓度选择 | 第33页 |
| 2.6 预杂交 | 第33页 |
| 2.7 芯片杂交后清洗 | 第33页 |
| 2.8 扫描结果的判定 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.1 探针的扩增与纯化结果 | 第34-35页 |
| 3.2 点样液的选择 | 第35-36页 |
| 3.3 水合时间的选择 | 第36-37页 |
| 3.4 洗液及干燥方式选择 | 第37-38页 |
| 3.5 探针基因浓度选择结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.1 共检芯片的制备 | 第39页 |
| 4.2 芯片杂交、阳性判定标准及扫描仪参数设定 | 第39-40页 |
| 5 小结 | 第40-41页 |
| 第二章 靶基因杂交条件优化 | 第41-55页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| 1.1 试剂和仪器设备 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.1 靶基因标记方式的选择 | 第41-42页 |
| 2.2 靶基因扩增方式选择 | 第42-43页 |
| 2.3 靶基因杂交时间及杂交温度选择 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-52页 |
| 3.1 靶基因标记方式的选择 | 第43-44页 |
| 3.2 靶基因扩增方式选择结果 | 第44-48页 |
| 3.3 靶基因杂交时间选择结果 | 第48-50页 |
| 3.4 共检芯片杂交温度选择结果 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 4.1 靶基因标记方法的选择 | 第52页 |
| 4.2 靶基因扩增条件的选择 | 第52-53页 |
| 4.3 杂交条件的选择 | 第53-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 共检芯片的质量评价及应用 | 第55-69页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 TGEV-PEDV-PoRV共检芯片 | 第55页 |
| 1.2 芯片相关材料及主要试剂 | 第55页 |
| 1.3 已知样本 | 第55-56页 |
| 1.4 未知样本 | 第56页 |
| 1.5 主要仪器 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| 2.1. 共检芯片的特异性 | 第56页 |
| 2.2 共检芯片的灵敏性 | 第56-57页 |
| 2.3 共检芯片的重复性及保存期 | 第57页 |
| 2.4 共检芯片的应用 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-67页 |
| 3.1 共检芯片的特异性性结果 | 第58-59页 |
| 3.2 共检芯片的灵敏性结果 | 第59-61页 |
| 3.3 共检芯片的重复性结果 | 第61-62页 |
| 3.4 抽取RNA试剂盒选择 | 第62-63页 |
| 3.5 已知样本检测结果 | 第63页 |
| 3.6 送检样本检测结果 | 第63-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.1 不对称PCR对芯片杂交的影响 | 第67-68页 |
| 4.2 芯片的特异性与灵敏性 | 第68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
