| 论文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 综述 | 第15-33页 |
| 1.1 纤毛虫休眠现象的研究 | 第15-25页 |
| 1.1.1 原生动物概况 | 第15页 |
| 1.1.2 纤毛虫的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.1.3 纤毛虫休眠包囊的研究 | 第17-19页 |
| 1.1.4 形成休眠包囊的因素 | 第19-21页 |
| 1.1.5 纤毛虫休眠包囊的种类和成分 | 第21-23页 |
| 1.1.6 纤毛虫休眠现象研究的意义 | 第23-25页 |
| 1.2 实时荧光定量PCR研究进展 | 第25-27页 |
| 1.2.1 实时荧光定量PCR技术 | 第25-26页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR的定量方法 | 第26-27页 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR的应用 | 第27页 |
| 1.3 蛋白质组学研究进展 | 第27-31页 |
| 1.3.1 蛋白质组学的发展史 | 第27页 |
| 1.3.2 蛋白质组学研究的技术 | 第27-30页 |
| 1.3.2.1 双向电泳技术(2-DE) | 第28页 |
| 1.3.2.2 质谱技术(MS) | 第28-30页 |
| 1.3.2.2.1 基质辅助激光解吸质谱(MALDI TOF/MS) | 第29页 |
| 1.3.2.2.2 多维液相色谱-离子阱串联质谱技术(LC-MS/MS) | 第29-30页 |
| 1.3.2.3 生物信息学 | 第30页 |
| 1.3.3 蛋白质组学的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 本课题的研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 包囊游仆虫细胞分化前后差异表达基因的筛选及分析 | 第33-57页 |
| 2.1 材料、仪器和试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.1 实验材料的培养 | 第33-34页 |
| 2.1.2 所用仪器设备 | 第34页 |
| 2.1.3 实验试剂与试剂盒 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.2.1 分别收集营养细胞和休眠包囊 | 第35页 |
| 2.2.1.1 营养细胞收集方法 | 第35页 |
| 2.2.1.2 休眠细胞收集方法 | 第35页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.3 总RNA浓度的测定 | 第36页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第36-37页 |
| 2.2.5 实时荧光相对定量PCR | 第37-39页 |
| 2.2.5.1 差异表达基因的相对定量方法 | 第37-38页 |
| 2.2.5.2 内参基因的选择 | 第38页 |
| 2.2.5.3 实时荧光定量PCR反应体系 | 第38页 |
| 2.2.5.4 实时荧光定量PCR反应条件 | 第38-39页 |
| 2.2.5.5 PCR产物测序及序列分析 | 第39页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第39-51页 |
| 2.3.1 总RNA定性定量分析 | 第39页 |
| 2.3.2 实时荧光相对定量PCR | 第39-51页 |
| 2.3.2.1 引物设计 | 第39-43页 |
| 2.3.2.2 内参基因的选择 | 第43-45页 |
| 2.3.2.2.1 Actin基因扩增曲线 | 第43-44页 |
| 2.3.2.2.2 Actin融解曲线 | 第44-45页 |
| 2.3.2.3 编号W3基因的扩增曲线和融解曲线 | 第45-46页 |
| 2.3.2.4 相对定量分析 | 第46-49页 |
| 2.3.2.5 序列分析 | 第49-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-57页 |
| 第三章 包囊游仆虫休眠包囊和营养细胞全蛋白的双向电泳分析 | 第57-74页 |
| 3.1 材料、仪器和试剂 | 第57-59页 |
| 3.1.1 实验材料的培养 | 第57页 |
| 3.1.2 所用仪器设备 | 第57-58页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第58-59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 3.2.1 蛋白质的提取 | 第59页 |
| 3.2.2 等电聚焦 | 第59-60页 |
| 3.2.3 胶条平衡及SDS-PAGE电泳 | 第60页 |
| 3.2.4 凝胶染色 | 第60页 |
| 3.2.5 凝胶扫描以及图像分析 | 第60-61页 |
| 3.2.6 蛋白质酶解 | 第61页 |
| 3.2.7 质谱操作 | 第61-62页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第62-71页 |
| 3.3.1 蛋白定量结果 | 第62-63页 |
| 3.3.2 双向电泳分析结果 | 第63-64页 |
| 3.3.3 图像分析结果 | 第64-69页 |
| 3.3.4 质谱鉴定结果 | 第69-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-73页 |
| 3.5 小结 | 第73-74页 |
| 第四章 包囊游仆虫休眠包囊壁蛋白的分离鉴定 | 第74-92页 |
| 4.1 材料、仪器和试剂 | 第74-77页 |
| 4.1.1 实验材料的培养 | 第74页 |
| 4.1.2 所用仪器设备 | 第74-75页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第75-77页 |
| 4.1.3.1 SDS-PAGE实验试剂 | 第75-76页 |
| 4.1.3.2 串联质谱实验试剂 | 第76-77页 |
| 4.2 实验方法 | 第77-81页 |
| 4.2.1 收集休眠包囊 | 第78页 |
| 4.2.2 包囊壁蛋白的分离、溶解和脱盐浓缩 | 第78页 |
| 4.2.3 包囊壁蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第78-79页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE条带的串联质谱(MS/MS)分析 | 第79-81页 |
| 4.2.4.1 胶内酶解及Ziptip脱盐 | 第79-80页 |
| 4.2.4.2 蛋白条带质谱分析 | 第80页 |
| 4.2.4.3 数据库检索(MALDI TOF/MS) | 第80-81页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第81-89页 |
| 4.3.1 壁蛋白SDS-PAGE图谱 | 第81-82页 |
| 4.3.2 电泳条带的质谱(MALDI TOF/MS)鉴定结果 | 第82-88页 |
| 4.3.2.1 62kDa条带的肽质量指纹图谱 | 第82页 |
| 4.3.2.2 八个条带的串联质谱鉴定结果 | 第82-88页 |
| 4.3.3 条带鉴定结果及分析 | 第88-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-91页 |
| 4.5 小结 | 第91-92页 |
| 中英文缩写词对照表 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-108页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第108页 |
| 研究生期间参与科研项目 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
