| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪言 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 异丁醇主要生产技术与应用现状 | 第9-11页 |
| 1.3 异丁醇生物合成研究现状 | 第11-18页 |
| 1.3.1 大肠杆菌生物合成异丁醇 | 第13-15页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌生物合成异丁醇 | 第15-17页 |
| 1.3.3 其他菌株生物合成异丁醇 | 第17-18页 |
| 1.4 研究背景与及主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5 本实验的技术路线 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要试剂与缓冲液配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第23-35页 |
| 2.2.1 酿酒酵母总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 乳酸乳球菌基因组DNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 电泳检测 | 第25页 |
| 2.2.4 DNA的纯度及浓度测定 | 第25页 |
| 2.2.5 目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 CaCl_2法制备感受态细胞 | 第27页 |
| 2.2.8 载体pMD18-T的构建与筛选 | 第27-30页 |
| 2.2.9 pSTV-29表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.10 蛋白质SDA-PAGE电泳 | 第34页 |
| 2.2.11 10%葡萄糖摇瓶发酵实验 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-55页 |
| 3.1 adh2基因的克隆与表达 | 第35-41页 |
| 3.1.1 酿酒酵母总DNA的提取 | 第35页 |
| 3.1.2 adh2基因的扩增 | 第35-36页 |
| 3.1.3 adh2基因与T载体连接 | 第36-38页 |
| 3.1.4 pSTV-29-adh2表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.2 kivd基因的克隆与表达 | 第41-48页 |
| 3.2.1 乳酸乳球菌总DNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.2 kivd基因的扩增 | 第42-43页 |
| 3.2.3 kivd基因与T载体连接 | 第43-44页 |
| 3.2.4 pSTV-29-kivd表达载体的构建 | 第44-48页 |
| 3.3 大肠杆菌工程菌的构建与诱导表达 | 第48-51页 |
| 3.3.1 工程菌的构建 | 第48-51页 |
| 3.3.2 诱导表达 | 第51页 |
| 3.4 重组菌的异丁醇发酵实验与检测 | 第51-55页 |
| 3.4.1 标准曲线 | 第51-53页 |
| 3.4.2 发酵实验结果检测 | 第53-55页 |
| 第四章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 4.1 结论 | 第55页 |
| 4.2 讨论 | 第55-56页 |
| 4.3 创新点 | 第56页 |
| 4.4 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录A 英文缩略词及中英文对照 | 第65-66页 |
| 附录B 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 附录C pMD18-T载体和pSTV-29载体图谱 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
