| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第16-27页 |
| 一 原癌基因Myc简介 | 第16页 |
| 二 原癌基因Myc的功能 | 第16-18页 |
| 1 Myc的多功能性 | 第16-17页 |
| 2 转录活化因子 | 第17页 |
| 3 转录抑制因子 | 第17页 |
| 4 促进细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 5 肿瘤代谢 | 第18页 |
| 三 Myc的调控机制 | 第18-20页 |
| 1 翻译后蛋白酶体降解 | 第18-19页 |
| 2 转录控制和mRNA稳定性 | 第19-20页 |
| 四 蛋白酶体 | 第20-24页 |
| 1 蛋白酶体降解过程 | 第20-21页 |
| 2 蛋白酶体结构组成 | 第21-22页 |
| 3 REG家族及其生物学功能 | 第22-24页 |
| 五 果蝇研究系统 | 第24-27页 |
| 1 果蝇研究系统概述 | 第24-25页 |
| 2 作为模式生物研究信号转导 | 第25页 |
| 3 果蝇中REG和dmyc的功能和作用 | 第25-26页 |
| 4 利用Gal4-UAS系统研究重要基因 | 第26-27页 |
| 第二章 REG_γ介导c-Myc蛋白酶体降解 | 第27-47页 |
| 一 引言 | 第27页 |
| 二 实验材料试剂与仪器 | 第27-33页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2 试剂 | 第28-33页 |
| 3 主要仪器 | 第33页 |
| 三 实验方法 | 第33-36页 |
| 1 经典磷酸钙法转染293T细胞 | 第33页 |
| 2 脂质体Lipo2000转染siRNA | 第33-34页 |
| 3 蛋白质免疫印迹 | 第34-35页 |
| 4 免疫荧光流程 | 第35页 |
| 5 利用放线菌酮测定蛋白半衰期 | 第35-36页 |
| 四 结果与分析 | 第36-45页 |
| 1 小规模筛选确定REG_γ潜在的蛋白底物 | 第36页 |
| 2 过表达REG_γ介导外源c-Myc降解 | 第36-37页 |
| 3 LPDS系统研究REG_γ对c-Myc降解 | 第37-38页 |
| 4 过表达REG_γ对内源c-Myc降解 | 第38页 |
| 5 抑制19S蛋白酶体对c-Myc蛋白影响 | 第38-39页 |
| 6 内源REG_γ对内源c-Myc的影响 | 第39-40页 |
| 7 内源REG_γ缺失对c-Myc半衰期的影响 | 第40页 |
| 8 过表达REG_γ对c-Myc降解不依赖Fbw7 | 第40-42页 |
| 9 过表达REG_γ特异性结合外源c-Myc蛋白 | 第42页 |
| 10 内源REG_γ与内源异性c-Myc蛋白作用 | 第42页 |
| 11 寻找REG_γ和c-Myc相互作用结构域 | 第42-43页 |
| 12 成纤维细胞系中REG_γ对c-Myc的调节 | 第43-44页 |
| 13 免疫荧光检测内源REG_γ对c-Myc的影响 | 第44页 |
| 14 REG_γ缺失成纤维细胞系中对c-Myc半衰期影响 | 第44-45页 |
| 五 小结和讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 REG_γ对c-Myc mRNA水平和转录活性调节 | 第47-56页 |
| 一 引言 | 第47页 |
| 二 实验材料试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| 2 试剂 | 第48页 |
| 3 主要仪器 | 第48页 |
| 三 实验方法 | 第48-51页 |
| 1 双荧光素酶报告基因 | 第48-49页 |
| 2 RNA的抽提 | 第49页 |
| 3 反转录PCR | 第49页 |
| 4 引物设计原则 | 第49-50页 |
| 5 琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
| 6.Actinomycin D (ActD) chase assay | 第50页 |
| 7 慢病毒包装 | 第50-51页 |
| 四 结果与分析 | 第51-54页 |
| 1 荧光素酶报告基因检测REG_γ对c-Myc转录活性影响 | 第51-52页 |
| 2 REG_γ调节c-Myc mRNA水平 | 第52页 |
| 3 REG_γ细微调节c-Myc mRNA稳定性 | 第52-53页 |
| 4 REG_γ通过Wnt信号通路调节c-Myc mRNA水平 | 第53-54页 |
| 5 REG_γ选择性调节Wnt信号通路 | 第54页 |
| 五 小结和讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 REG_γ对c-Myc诱导的细胞增殖的调节 | 第56-63页 |
| 一 引言 | 第56页 |
| 二 实验材料试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 1 实验材料 | 第56页 |
| 2 试剂 | 第56-57页 |
| 3 主要仪器 | 第57页 |
| 三 实验方法 | 第57-59页 |
| 1 Edu检测细胞增殖 | 第57-58页 |
| 2 琼脂克隆形成实验 | 第58页 |
| 3 MTT比色法检测细胞生长和存活速率 | 第58-59页 |
| 四 结果与分析 | 第59-62页 |
| 1 Edu检测REG_γ对c-Myc引起细胞增殖影响 | 第59-60页 |
| 2 内源REG_γ对细胞增殖的影响 | 第60-62页 |
| 五 小结和讨论 | 第62-63页 |
| 第五章 在果蝇模式中,dREG对dmyc的调控保守性 | 第63-80页 |
| 一 前言 | 第63-64页 |
| 二 实验材料试剂与仪器 | 第64-66页 |
| 1 实验材料 | 第64页 |
| 2 试剂 | 第64-66页 |
| 3 主要仪器 | 第66页 |
| 三 实验方法 | 第66-73页 |
| 1 果蝇培养 | 第66-67页 |
| 2 果蝇翅膀成虫盘(disc)染色 | 第67页 |
| 3 S2细胞培养及转染 | 第67页 |
| 4 PCR反应体系 | 第67-68页 |
| 5 胶回收步骤 | 第68页 |
| 6 连接 | 第68-69页 |
| 7 转化 | 第69页 |
| 8 质粒抽提 | 第69页 |
| 9 dsRNA的制备 | 第69-70页 |
| 10 dsRNA处理细胞,下调目的基因表达 | 第70页 |
| 11 RNA提取 | 第70-71页 |
| 12 反转录cDNA合成 | 第71页 |
| 13. Quantitative real-time PCR (BioracHQ SYBR Green supermix) | 第71页 |
| 14 显微注射技术构建果蝇转基因品系 | 第71-72页 |
| 15 果蝇杂交重组 | 第72-73页 |
| 四 结果与分析 | 第73-78页 |
| 1 果蝇器官特异性下调REG造成生长异常 | 第73-74页 |
| 2 在果蝇翅膀成虫盘(disc)中,下调REG促进细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 3 REG促进细胞凋亡依赖于dmyc的表达 | 第75-76页 |
| 4 下调REG增加dmyc mRNA表达 | 第76-77页 |
| 5 探索REG调控dmyc转录水平的机制 | 第77-78页 |
| 五 小结和讨论 | 第78-80页 |
| 第六章 论文总结 | 第80-82页 |
| 附录Ⅰ 缩略词 | 第82-84页 |
| 附录Ⅱ 攻读博士学位期间科研工作成果 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
