| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要缩略词 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 第一章 绵羊支原体肺炎与甘露糖结合凝集素 | 第13-22页 |
| 1 绵羊支原体肺炎 | 第13-17页 |
| 1.1 绵羊支原体肺炎病原学研究 | 第13-15页 |
| 1.1.1 病原分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 培养特性 | 第14页 |
| 1.1.3 染色特性 | 第14页 |
| 1.1.4 免疫特性 | 第14页 |
| 1.1.5 临床特征及病理变化 | 第14-15页 |
| 1.2 绵羊支原体肺炎致病性与致病机理 | 第15-16页 |
| 1.2.1 绵羊肺炎支原体的毒力 | 第15页 |
| 1.2.2 绵羊肺炎支原体的致病机制 | 第15-16页 |
| 1.3 近年绵羊支原体肺炎研究热点与进展 | 第16-17页 |
| 2 甘露糖凝集素 | 第17-20页 |
| 2.1 MBL与感染性疾病的相关性研究 | 第18-19页 |
| 2.2 MBL与肺炎支原体肺炎的相关性研究 | 第19-20页 |
| 2.3 MBL抗病机制 | 第20页 |
| 本研究的目的意义 | 第20-22页 |
| 试验研究 | 第22-70页 |
| 第二章 转录组测序与数据分析 | 第22-51页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 实验动物 | 第22页 |
| 1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-30页 |
| 2.1 受试绵羊基因分型与分组 | 第23页 |
| 2.2 MP疾病模型的建立 | 第23-24页 |
| 2.2.1 MO的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 菌液浓度的检测与判读 | 第23-24页 |
| 2.2.3 绵羊肺炎支原体的鉴定 | 第24页 |
| 2.2.4 人工感染 | 第24页 |
| 2.3 MBL对MP患羊的免疫治疗 | 第24-26页 |
| 2.3.1 MBL的获取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 MBL的检测 | 第25页 |
| 2.3.3 MBL注射 | 第25-26页 |
| 2.4 采样与测序 | 第26页 |
| 2.5 测序结果分析 | 第26-30页 |
| 2.5.1 数据质量控制 | 第26页 |
| 2.5.2 基因注释 | 第26页 |
| 2.5.3 测序序列比对 | 第26-27页 |
| 2.5.4 转录本重构 | 第27-28页 |
| 2.5.5 各样本转录本表达统计 | 第28页 |
| 2.5.6 转录本表达估计的质量控制 | 第28页 |
| 2.5.7 样本表达水平定量质量控制 | 第28-29页 |
| 2.5.8 差异表达基因的判定 | 第29页 |
| 2.5.9 差异表达基因的GO功能分析 | 第29页 |
| 2.5.10 差异表达基因KEGG通路分析 | 第29页 |
| 2.5.11 差异表达基因功能注释 | 第29-30页 |
| 2.5.12 样本SNP分析 | 第30页 |
| 2.6 备选验证基因的确定与可能通路分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-47页 |
| 3.1 受试绵羊基因分型结果 | 第30-31页 |
| 3.2 绵羊肺炎支原体的鉴定结果 | 第31页 |
| 3.3 MBL重组蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果 | 第31-32页 |
| 3.4 MBL单糖配体结合试验结果 | 第32页 |
| 3.5 MBL免疫治疗效果 | 第32-34页 |
| 3.6 转录组测序数据质量控制 | 第34-36页 |
| 3.7 转录组序列比对结果统计 | 第36-37页 |
| 3.8 novel转录本的分析 | 第37-38页 |
| 3.9 本转录本表达分析 | 第38-41页 |
| 3.10 差异表达基因筛选与分析 | 第41-44页 |
| 3.11 样品SNP分析结果 | 第44-46页 |
| 3.12 备选验证基因及其可能通路分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 MO的培养与鉴定 | 第47页 |
| 4.2 MBL的分子量检测 | 第47-48页 |
| 4.3 不同MBL外显子基因型抗病能力 | 第48页 |
| 4.4 关于转录组测序 | 第48-49页 |
| 4.5 备选验证差异基因与致病机理 | 第49-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 绵羊呼吸道上皮细胞的分离纯化与鉴定 | 第51-59页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 实验动物 | 第51页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第51页 |
| 1.3 主要实验试剂耗材 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 细胞完全培养基配方 | 第52页 |
| 2.2 绵羊呼吸道上皮细胞原代培养 | 第52页 |
| 2.3 绵羊呼吸道上皮细胞的分离纯化 | 第52-53页 |
| 2.4 细胞传代 | 第53页 |
| 2.5 细胞的爬片的制备 | 第53页 |
| 2.6 细胞的吉姆萨染色与镜检 | 第53页 |
| 2.7 细胞免疫组化 | 第53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-58页 |
| 3.1 上皮细胞与成纤维细胞形态比较 | 第53-54页 |
| 3.2 绵羊呼吸道上皮细胞与成纤维细胞的分离 | 第54-55页 |
| 3.3 细胞爬片的吉姆萨染色 | 第55-56页 |
| 3.4 上皮细胞的免疫组化染色 | 第56-57页 |
| 3.5 假复层纤毛柱上皮细胞的观察 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58页 |
| 5 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 MBL抗MP相关差异基因验证 | 第59-70页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1 主要实验仪器 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| 2.1 易感型绵羊与抗病型绵羊细胞培养与鉴定 | 第60页 |
| 2.2 绵羊呼吸道上皮细胞的MO感染 | 第60页 |
| 2.3 PI染色法检测细胞存活率 | 第60页 |
| 2.4 荧光定量PCR法检测MYC、FGF1基因的表达 | 第60-62页 |
| 2.4.1 细胞的RNA提取 | 第60-61页 |
| 2.4.2 细胞总RNA的质量检测 | 第61页 |
| 2.4.3 基因组DNA污染的去除 | 第61页 |
| 2.4.4 反转录 | 第61页 |
| 2.4.5 引物的获得与检测 | 第61-62页 |
| 2.4.6 实时荧光定量PCR | 第62页 |
| 2.5 数据统计 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-67页 |
| 3.1 测序结果SNP分析 | 第62页 |
| 3.2 琼脂糖凝胶电泳检测结果 | 第62-64页 |
| 3.3 MO致绵羊呼吸道上皮细胞凋亡结果 | 第64-65页 |
| 3.4 MBL对MO致绵羊呼吸道上皮细胞凋亡的影响 | 第65页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR检测各组细胞FGF1基因转录水平 | 第65-66页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR检测各组细胞C-Myc基因转录水平 | 第66-67页 |
| 3.7 实时荧光定量PCR检测各组细胞c-jun基因转录水平 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70页 |
| 创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简介 | 第79-81页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第81页 |
