| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 生物固氮的意义 | 第12-13页 |
| 1.2 根瘤菌的简介及分类 | 第13-15页 |
| 1.2.1 根瘤菌的定义及特性 | 第13页 |
| 1.2.2 根瘤菌的分类 | 第13-15页 |
| 1.3 根瘤菌与豆科植物共生固氮体系 | 第15-25页 |
| 1.3.1 根瘤菌与豆科植物早期信号识别 | 第15-16页 |
| 1.3.2 结瘤因子 | 第16-18页 |
| 1.3.3 根瘤的形成和发育 | 第18-20页 |
| 1.3.4 根瘤菌-豆科植物信号转导途径 | 第20-22页 |
| 1.3.5 其它共生相关基因 | 第22页 |
| 1.3.6 根瘤菌-豆科植物共生与免疫 | 第22-23页 |
| 1.3.7 百脉根根瘤菌Mesorhizobium loti MAFF30309 | 第23-25页 |
| 1.4 本研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-41页 |
| 2.1 材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第27-28页 |
| 2.1.3 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.4 抗生素及反应试剂 | 第29页 |
| 2.1.5 主要分子生物学试剂 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-41页 |
| 2.2.1 供体菌E. coli S17-1/pMH1701的获得 | 第30-31页 |
| 2.2.2 MAFF303099电转化感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.3 MAFF303099对数期的估算及抗生素敏感性检测 | 第32-33页 |
| 2.2.4 MAFF303099 Tn5-sacB突变体库的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.4.1 三亲本杂交操作 | 第33页 |
| 2.2.4.2 突变体的复筛 | 第33-34页 |
| 2.2.4.3 三亲本转化效率的计算 | 第34页 |
| 2.2.4.4 突变体库菌株的培养及保藏 | 第34-35页 |
| 2.2.5 TAIL-PCR扩增Tn5-sacB侧翼序列 | 第35-38页 |
| 2.2.6 突变体快速筛选方法 | 第38页 |
| 2.2.7 突变体共生表型观察 | 第38-41页 |
| 2.2.7.1 盆栽接种观察共生表型 | 第38-39页 |
| 2.2.7.2 平板结瘤实验 | 第39-40页 |
| 2.2.7.3 百脉根NINpro-GUS转基因植株GUS组织化学染色 | 第40-41页 |
| 3 结果和分析 | 第41-53页 |
| 3.1 根瘤菌MAFF303099 Tn5-sac B插入突变体库的构建 | 第41-49页 |
| 3.1.1 MAFF303099生长状态及抗生素敏感性检测 | 第41-42页 |
| 3.1.2 质粒pMH1701的鉴定 | 第42页 |
| 3.1.3 三亲本杂交将pMH1701质粒转入MAFF303099 | 第42-43页 |
| 3.1.4 验证SM+Km平板长出的菌落的均有质粒转入 | 第43-44页 |
| 3.1.5 三亲本杂交转化效率的计算 | 第44-45页 |
| 3.1.6 突变菌株的复筛与培养 | 第45页 |
| 3.1.7 复筛后的突变菌株无大肠杆菌污染 | 第45-46页 |
| 3.1.8 突变菌株中Tn5-sacB均插入基因组 | 第46-47页 |
| 3.1.9 TAIL-PCR扩增Tn5-sacB插入位点侧翼序列 | 第47-48页 |
| 3.1.10 突变体库的构建与保藏 | 第48-49页 |
| 3.2 共生相关突变体的筛选及表型分析 | 第49-53页 |
| 3.2.1 MAFF303099 nodB基因突变体的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.2 nodB基因插入失活突变体的表型分析 | 第51-53页 |
| 3.2.2.1 MAFF303099/nodB-1 不能使百脉根结瘤 | 第51-52页 |
| 3.2.2.2 MAFF303099/nodB-1 可以诱导LjNIN的表达 | 第52-53页 |
| 4 总结和讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 总结 | 第53-54页 |
| 4.2 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-67页 |
| 附录一 本实验所用的引物 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
