| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 RANKL的研究进展 | 第13-22页 |
| 1 RANKL的发现 | 第13页 |
| 2 RANKL的结构和分布 | 第13-14页 |
| 3 RANKL的功能 | 第14-15页 |
| ·RANKL对骨代谢的作用 | 第14-15页 |
| ·RANKL是破骨细胞的分化因子 | 第14页 |
| ·RANKL对钙代谢的影响 | 第14页 |
| ·反义RANKL基因对OC生成的影响 | 第14-15页 |
| ·RANKL对免疫系统的作用 | 第15页 |
| 4 RANKL的作用机制 | 第15页 |
| 5 RANKL的信号转导通路 | 第15-16页 |
| ·c-Src途径 | 第15-16页 |
| ·JNK途径 | 第16页 |
| ·NF-κB途径 | 第16页 |
| 6 RANKL与骨免疫学 | 第16-17页 |
| 7 RANKL与一些骨疾病的关系 | 第17-20页 |
| ·RANKL与骨质疏松 | 第17页 |
| ·RANKL与骨折和类风湿性关节炎(RA) | 第17-18页 |
| ·RANKL与人工关节无菌性松动 | 第18-19页 |
| ·RANKL与牙周炎 | 第19-20页 |
| 8 RANKL与蛋鸡骨质疏松症 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 下篇 试验研究 | 第25-61页 |
| 第二章 鸡RANKL活性区基因的克隆 | 第25-35页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌体和载体 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第26-27页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第27-28页 |
| ·重组载体pMD18-T-RANKL的鉴定和PCR产物序列测定 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29-31页 |
| ·鸡RANKL基因的序列分析 | 第29页 |
| ·鸡RANKL cDNA的扩增 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-chRANKL的构建及酶切鉴定结果 | 第30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-chRANKL的序列比较 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-35页 |
| 第三章 鸡RANKL活性区基因的原核表达、纯化及鉴定 | 第35-51页 |
| 1 材料与方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·菌体和载体 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·鸡RANKL原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)-chRANKL的鉴定 | 第37页 |
| ·菌株的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·菌株的优化诱导表达 | 第38页 |
| ·SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳鉴定表达产物 | 第38-39页 |
| ·表达产物存在形式的确定 | 第39-40页 |
| ·包涵体的制备溶解 | 第40页 |
| ·表达产物的纯化 | 第40页 |
| ·Western blot鉴定表达产物 | 第40-42页 |
| 2 结果 | 第42-47页 |
| ·原核表达质粒的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| ·鸡RANKL的诱导表达鉴定 | 第43-45页 |
| ·鸡骨钙素诱导表达蛋白形式的鉴定 | 第45页 |
| ·表达产物的纯化 | 第45-46页 |
| ·样品蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| ·鸡RANKL蛋白Western blot分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 4 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第四章 抗鸡RANKL多克隆抗体的制备和应用 | 第51-61页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·鸡RANKL多克隆抗体的制备 | 第52页 |
| ·间接ELISA检测抗体效价 | 第52-53页 |
| ·鸡RANKL蛋白抗体的Western blot鉴定 | 第53页 |
| ·鸡RANKL蛋白抗体的免疫细胞化学应用 | 第53-55页 |
| ·鸡RANKL蛋白抗体的Western blot应用 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-57页 |
| ·兔抗RANKL 血清效价的测定 | 第55页 |
| ·兔抗RANKL 血清效价的Western blot鉴定 | 第55-56页 |
| ·成骨细胞培养及鉴定 | 第56页 |
| ·兔抗RANKL 血清的免疫细胞化学应用 | 第56-57页 |
| ·兔抗RANKL 血清的Western blot应用 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 论文创新之处 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
