| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 乙型肝炎病毒与肝细胞疾病 | 第16-34页 |
| 1.1 乙型肝炎病毒的分子生物学概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 HBV的形态学特征 | 第16-17页 |
| 1.1.2 HBV的基因组 | 第17-18页 |
| 1.2 HBV的转录和复制 | 第18-20页 |
| 1.3 乙型肝炎病毒编码的蛋白 | 第20-23页 |
| 1.3.1 外膜蛋白(表面抗原) | 第20-21页 |
| 1.3.2 核壳蛋白(核心抗原) | 第21页 |
| 1.3.3 P蛋白 | 第21-22页 |
| 1.3.4 HBx蛋白 | 第22-23页 |
| 1.4 乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌 | 第23-34页 |
| 1.4.1 乙型肝炎病毒相关慢性肝炎的作用 | 第24-25页 |
| 1.4.2 慢性乙型肝炎在肝细胞癌的作用 | 第25-31页 |
| 1.4.3 HBV-慢性感染可能仍是HBsAg阴性肝癌的威胁因素 | 第31-34页 |
| 第二章 胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1) | 第34-39页 |
| 2.1 CTHRC1蛋白的生物学特性 | 第34-35页 |
| 2.1.1 CTHRC1蛋白的结构 | 第34-35页 |
| 2.1.2 CTHRC1蛋白的修饰 | 第35页 |
| 2.1.3 CTHRC1的表达方式与 TGF-β家族成员的基因重叠 | 第35页 |
| 2.2 CTHRC1蛋白的功能 | 第35-38页 |
| 2.2.1 CTHRC1可以抑制对TGF-β敏感的基因的表达 | 第36页 |
| 2.2.2 CTHRC1基因增强了细胞转移和阻止胶原蛋白沉积 | 第36-37页 |
| 2.2.3 CTHRC1在血管重塑过程的作用 | 第37-38页 |
| 2.3 CTHRC1基因与肿瘤的相关性 | 第38-39页 |
| 第三章 与癌症相关的一些基因的概述 | 第39-45页 |
| 3.1 缺氧诱导因子一(HIF-1A) | 第39-40页 |
| 3.2 血管内皮生长因子(VEGF) | 第40-42页 |
| 3.3 抑癌基因P53基因 | 第42-43页 |
| 3.3.1 p53基因的发现 | 第42页 |
| 3.3.2 p53基因的功能 | 第42-43页 |
| 3.3.3 突变型p53的功能 | 第43页 |
| 3.4 金属蛋白水解酶家族(MMPs) | 第43-45页 |
| 第四章 乙肝病毒感染临床样本的CTHRC1基因表达 | 第45-73页 |
| 4.1 研究材料 | 第45-48页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第45-46页 |
| 4.1.2 菌种和质粒 | 第46页 |
| 4.1.3 工具酶和试剂盒 | 第46-47页 |
| 4.1.4 引物 | 第47页 |
| 4.1.5 其他他试剂 | 第47页 |
| 4.1.6 仪器设备 | 第47-48页 |
| 4.1.7 统计学分析 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-64页 |
| 4.2.1 从组织中提取总RNA | 第48-50页 |
| 4.2.2 RT-RCR反应 | 第50-51页 |
| 4.2.3 Real-Time PCR反应 | 第51-52页 |
| 4.2.4 组织样本的Western Blot检测 | 第52-54页 |
| 4.2.5 免疫组化检测 | 第54页 |
| 4.2.6 CTHRC1基因的克隆表达 | 第54-59页 |
| 4.2.7 CTHRC1蛋白的诱导表达和纯化 | 第59-62页 |
| 4.2.8 ELISA方法检测患者血清中CTHRC1蛋白含量 | 第62-64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-71页 |
| 4.3.1 CTHRC1基因的成功克隆 | 第64-65页 |
| 4.3.2 CTHRC1蛋白的诱导表达和纯化结果 | 第65-67页 |
| 4.3.3 CTHRC1基因临床表达水平的检测结果 | 第67-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 乙型肝炎病毒感染诱导CTHRC1基因表达 | 第73-90页 |
| 5.1 实验材料 | 第73-75页 |
| 5.1.1 质粒和细胞 | 第73页 |
| 5.1.2 工具酶和试剂盒 | 第73-74页 |
| 5.1.3 引物 | 第74-75页 |
| 5.1.4 其他试剂 | 第75页 |
| 5.1.5 细胞培养所用试剂 | 第75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-85页 |
| 5.2.1 哺乳动物细胞培养 | 第75-76页 |
| 5.2.2 提取细胞总RNA | 第76-77页 |
| 5.2.3 RT-PCR | 第77页 |
| 5.2.4 Real-Time PCR反应 | 第77页 |
| 5.2.5 细胞样本的Western Blot检测 | 第77页 |
| 5.2.6 CTHRC1启动子质粒pGL3-CTHRC1-luc的构建 | 第77-78页 |
| 5.2.7 CTHRC1启动子截断质粒的构建 | 第78页 |
| 5.2.8 一步法构建CTHRC1启动子突变质粒 | 第78-80页 |
| 5.2.9 哺乳细胞转染实验 | 第80-82页 |
| 5.2.10 测定荧光色素酶活性 | 第82-83页 |
| 5.2.11 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第83-85页 |
| 5.3 实验结果 | 第85-89页 |
| 5.3.1 CTHRC1基因在不同细胞系的表达情况 | 第86页 |
| 5.3.2 HBV瞬时感染上调CTHRC1基因表达 | 第86页 |
| 5.3.3 HBV上调CTHRC1表达的时间依赖和浓度依赖机制 | 第86-87页 |
| 5.3.4 HBV诱导CTHRC1基因表达的信号通路机制初探 | 第87-89页 |
| 5.4 讨论 | 第89-90页 |
| 第六章 CTHRC1促进缺氧诱导因子1(HIF-1A)和血管内皮生长因子(VEGF)表达 | 第90-99页 |
| 6.1 实验材料 | 第90-91页 |
| 6.1.1 质粒和siRNA | 第90页 |
| 6.1.2 抗体 | 第90-91页 |
| 6.1.3 信号通路抑制剂 | 第91页 |
| 6.1.4 引物 | 第91页 |
| 6.2 实验方法 | 第91-93页 |
| 6.2.1 CTHRC1真核基因克隆 | 第91页 |
| 6.2.2 siRNA干抗实验 | 第91-92页 |
| 6.2.3 Real Time RT-PCR | 第92-93页 |
| 6.2.4 Western Blot检测 | 第93页 |
| 6.2.5 信号通路筛选 | 第93页 |
| 6.3 实验结果 | 第93-97页 |
| 6.3.1 si-CTHRC1可以有效地干扰CTHRC1基因的表达 | 第95页 |
| 6.3.2 在HepG2.2.15细胞中,干扰CTHRC1基因的表达,HIF-1α和VEGF基因表达水平下降 | 第95页 |
| 6.3.3 在HepG2细饱中,CTHRC1基因诱导HIF-1α和VEGF基因表达 | 第95-96页 |
| 6.3.4 CTHRC1可以促进ERK1/2和Akt蛋白的磷酸化 | 第96-97页 |
| 6.4 讨论 | 第97-99页 |
| 第七章 CTHRC1基因在体内和体外促进肿瘤生成和发展 | 第99-120页 |
| 7.1 实验材料 | 第99-101页 |
| 7.1.1 腺病毒 | 第99页 |
| 7.1.2 细胞系 | 第99-100页 |
| 7.1.3 试剂盒 | 第100页 |
| 7.1.4 抗体 | 第100页 |
| 7.1.5 引物 | 第100页 |
| 7.1.6 其他试剂和材料 | 第100页 |
| 7.1.7 实验动物 | 第100-101页 |
| 7.2 实验方法 | 第101-111页 |
| 7.2.1 细胞集落实验(Colonyformaion) | 第101-102页 |
| 7.2.2 沉淀去除CTHRC1融合蛋白内毒素 | 第102-103页 |
| 7.2.3 Western Blot检测 | 第103页 |
| 7.2.4 细胞迁移实验 | 第103-104页 |
| 7.2.5 细胞侵袭实验 | 第104-105页 |
| 7.2.6 重组腺病毒CTHRC1-RNAi-AD的构建 | 第105-110页 |
| 7.2.7 裸鼠成瘤实验 | 第110-111页 |
| 7.3 实验结果 | 第111-117页 |
| 7.3.1 CTHRC1降低抑癌基因p53的表达水平 | 第111-112页 |
| 7.3.2 CTHRC1促进细胞增殖 | 第112-113页 |
| 7.3.3 CTHRC1表达诱导MMP9基因的高表达 | 第113-114页 |
| 7.3.4 CTHRC1促进肝癌细胞迁移和侵袭 | 第114-116页 |
| 7.3.5 CTHRC1基因的缺失降低了裸鼠成瘤的能力 | 第116-117页 |
| 7.4 讨论 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-124页 |
| 附录 研究生期间发表论文和待发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
