| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 双生病毒的概述及研究进展 | 第14-24页 |
| 1.1.1 菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus) | 第14-16页 |
| 1.1.2 双生病毒的复制 | 第16-18页 |
| 1.1.3 双生病毒的转录 | 第18-19页 |
| 1.1.4 双生病毒的移动 | 第19-20页 |
| 1.1.5 双生病毒的致病机理 | 第20-21页 |
| 1.1.6 植物病毒病的防治措施 | 第21-24页 |
| 1.2 类转录激活效应子(TALE)的概述及研究进展 | 第24-32页 |
| 1.2.1 基因组编辑技术研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.2 TALE的发现 | 第26-28页 |
| 1.2.3 TALENs的研究 | 第28-30页 |
| 1.2.4 TALENs的应用 | 第30-32页 |
| 2 基于番茄黄曲叶病毒和甘蓝曲叶病毒的TALE质粒的组装与构建 | 第32-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2 靶向TYLCV和CaLCuV病毒链的人工TALE的设计 | 第33页 |
| 2.1.3 靶向TYLCV病毒链的人工TALE的组装 | 第33-36页 |
| 2.1.4 试剂盒法提取大肠杆菌的质粒 | 第36页 |
| 2.1.5 正确组装的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2 结果与分析 | 第37-39页 |
| 2.2.1 针对TYLCV和CaLCuV的TALE的设计 | 第37页 |
| 2.2.2 环形聚体的组装的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.3 人工TALE质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-40页 |
| 3 针对番茄黄曲叶病毒的TALE原核表达体系的建立与优化 | 第40-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-46页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 基本实验方法 | 第40-44页 |
| 3.1.3 人工TALE蛋白原核表达载体的构建 | 第44页 |
| 3.1.4 外源基因在大肠杆菌中的表达和蛋白质纯化 | 第44-46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-54页 |
| 3.2.1 人工TALE的截短与TALE原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.2 TALE蛋白高效表达体系的建立 | 第48-52页 |
| 3.2.3 His标签的人工TALE蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| 3.3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 基于人工TALE技术的抗双生病毒研究 | 第56-73页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-62页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第56页 |
| 4.1.2 凝胶阻滞实验的探针设计 | 第56页 |
| 4.1.3 凝胶阻滞实验 | 第56-57页 |
| 4.1.4 重组质粒pCAMBIA-L4、pCAMBIA-L5的构建 | 第57页 |
| 4.1.5 农杆菌的培养和转化 | 第57-58页 |
| 4.1.6 接种液的处理和接种方法 | 第58页 |
| 4.1.7 Western印迹分析 | 第58-59页 |
| 4.1.8 病毒的Southern印记检测 | 第59-61页 |
| 4.1.9 农杆菌介导的转基因 | 第61-62页 |
| 4.1.10 转基因植株的检测 | 第62页 |
| 4.2 结果与分析 | 第62-71页 |
| 4.2.1 人工TALE蛋白能够体外结合病毒靶序列 | 第62-65页 |
| 4.2.2 瞬时表达人工TALE蛋白干扰植物中病毒DNA的积累 | 第65-70页 |
| 4.2.3 筛选能够抗双生病毒的TO代转人工TALE基因的植株 | 第70-71页 |
| 4.3 讨论 | 第71-73页 |
| 5 全文小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录A 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第83-85页 |
| 附录B 本论文所用病毒缩写词及中英文对照 | 第85-86页 |
| 附录C 常用分子生物学试剂及仪器 | 第86-87页 |
| 附录D 常用缓冲液及培养基配方 | 第87-89页 |
