| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 双生病毒的发生、流行与危害 | 第14页 |
| 1.2 双生病毒的分类与基因组结构 | 第14-16页 |
| 1.3 单组份双生病毒伴随的卫星betasatellite分子的发现 | 第16页 |
| 1.4 双生病毒与RNA沉默 | 第16-20页 |
| 1.4.1 RNA沉默的基本机制 | 第16-18页 |
| 1.4.2 植物中的RNA沉默途径 | 第18-19页 |
| 1.4.3 双生病毒与植物RNA沉默之间的关系 | 第19-20页 |
| 1.5 TYLCCNV伴随的卫星betasatellite分子的结构和功能 | 第20-24页 |
| 1.5.1 βCl蛋白是症状决定因子 | 第21页 |
| 1.5.2 βCl蛋白抑制转录后水平的基因沉默 | 第21-22页 |
| 1.5.3 βCl蛋白抑制转录水平的基因沉默 | 第22-23页 |
| 1.5.4 磷酸化的βCl蛋白减弱其作为致病因子的功能 | 第23-24页 |
| 1.6 本课题的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 常规实验方法 | 第25-33页 |
| 2.1 常规克隆技术 | 第25-30页 |
| 2.1.1 PCR技术 | 第25-26页 |
| 2.1.2 PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| 2.1.3 加A反应 | 第27页 |
| 2.1.4 连接反应 | 第27-28页 |
| 2.1.5 CaCl2法制备感受态细胞 | 第28页 |
| 2.1.6 转化 | 第28页 |
| 2.1.7 菌落PCR筛斑 | 第28-29页 |
| 2.1.8 质粒的提取 | 第29页 |
| 2.1.9 酶切验证 | 第29-30页 |
| 2.2 电击转化农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.1 农杆菌感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.2 电击转化农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.3 接种农杆菌 | 第30页 |
| 2.3 Chop-PCR | 第30-31页 |
| 2.3.1 植物基因组DNA的小量提取 | 第30页 |
| 2.3.2 Chop-PCR | 第30-31页 |
| 2.4 蛋白的SDS-PAGE及Western印迹分析 | 第31-33页 |
| 2.4.1 植物总蛋白的提取 | 第31页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE及Western blot | 第31-33页 |
| 3 TYLCCNV卫星DNA编码的βCl蛋白及其磷酸化突变体抑制TGS差异的研究 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 病毒材料 | 第34页 |
| 3.1.3 βCl及其磷酸化突变体蛋白表达量的检测 | 第34页 |
| 3.1.4 TGS回复实验 | 第34页 |
| 3.1.5 16-TGS植株中GFP蛋白的检测 | 第34-35页 |
| 3.1.6 Chop-PCR检测病毒基因组的甲基化 | 第35-36页 |
| 3.2 结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.2.1 βCl的不同磷酸化突变体诱导植株产生症状的能力有所差异 | 第36-38页 |
| 3.2.2 βCl的组成型磷酸化突变体减弱其抑制GFP转录水平基因沉默的能力 | 第38-40页 |
| 3.2.3 βCl的组成型磷酸化突变体减弱了其抑制病毒基因组甲基化的能力 | 第40-41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-43页 |
| 4 全文小结 | 第43-44页 |
| 附文 双生病毒Y194编码的C4蛋白与烟草寄主因子NtRFP1蛋白的互作机制研究 | 第44-59页 |
| 1 绪论 | 第44-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-51页 |
| 2.1 材料 | 第46页 |
| 2.2 双分子荧光互补实验(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC) | 第46页 |
| 2.3 GST-pull down实验 | 第46-47页 |
| 2.4 NtRFP1转基因本氏烟的获得 | 第47-48页 |
| 2.5 植物总DNA的提取 | 第48页 |
| 2.6 植物总RNA的小量提取 | 第48页 |
| 2.7 反转录RT-PCR及RT-qPCR | 第48-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-59页 |
| 3.1 寄主因子NtRFP1蛋白与Y194编码的C4蛋白能够互作 | 第51-53页 |
| 3.2 双生病毒Y194的侵染对本氏烟NtRFP1 mRNA表达量的影响 | 第53页 |
| 3.3 Y194 C4转基因本氏烟在生长早期其体内NtRFP1 mRNA表达量的变化 | 第53-54页 |
| 3.4 过表达与沉默NtRFP1转基因本氏烟的获得 | 第54-56页 |
| 3.5 寄主因子NtRFP1对Y194致病性的影响 | 第56-58页 |
| 3.6 讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录A 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第67-69页 |
| 附录B 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第69-71页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第71-74页 |
