| 目录 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 人防御素的组织分布 | 第14-15页 |
| 1.3 人防御素的分子生物学特征 | 第15-20页 |
| 1.3.1 分子结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 基因结构及其定位 | 第16-18页 |
| 1.3.3 基因的表达调控 | 第18-19页 |
| 1.3.4 翻译后修饰 | 第19-20页 |
| 1.4 人防御素的抗菌活性及作用机理 | 第20-22页 |
| 1.4.1 抗菌活性 | 第20页 |
| 1.4.2 作用机理 | 第20-22页 |
| 1.5 人防御素的医学和药用价值及前景展望 | 第22-24页 |
| 1.5.1 医学及药用价值 | 第22-23页 |
| 1.5.2 前景展望 | 第23-24页 |
| 1.6 基因工程生产人防御素 | 第24-31页 |
| 1.6.1 国内外研究进展 | 第24页 |
| 1.6.2 表达系统的比较 | 第24-25页 |
| 1.6.3 大肠杆菌中的融合表达体系 | 第25-28页 |
| 1.6.4 大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白 | 第28-31页 |
| 1.7 小结 | 第31-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 2.1.1 质粒 | 第38页 |
| 2.1.2 菌种 | 第38-39页 |
| 2.1.3 抗体 | 第39页 |
| 2.1.4 工具酶及试剂盒 | 第39页 |
| 2.1.5 培养基 | 第39页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第39-40页 |
| 2.2 实验及分析方法 | 第40-44页 |
| 2.2.1 分子克隆相关实验 | 第40页 |
| 2.2.2 大肠杆菌菌体浓度测定 | 第40页 |
| 2.2.3 大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取 | 第40-41页 |
| 2.2.4 蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| 2.2.6 Western Blotting分析 | 第41-42页 |
| 2.2.7 还原糖浓度测定 | 第42-44页 |
| 第三章 人β-防御素-2的基因克隆、密码子优化及多拷贝串联基因的构建 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-49页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-54页 |
| 3.3.1 逆转录-PCR | 第49-50页 |
| 3.3.2 密码子优化 | 第50-51页 |
| 3.3.3 全基因合成 | 第51-52页 |
| 3.3.4 克隆载体构建 | 第52页 |
| 3.3.5 基因序列测定 | 第52页 |
| 3.3.6 定点突变 | 第52-53页 |
| 3.3.7 多拷贝串联基因构建 | 第53页 |
| 3.3.8 添加His-Tag | 第53-54页 |
| 3.4 小结 | 第54-56页 |
| 第四章 在大肠杆菌中表达人β-防御素-2 | 第56-74页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 材料与方法 | 第57-61页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第61-72页 |
| 4.3.1 HBD-2表达载体的构建及目标蛋白表达 | 第61-68页 |
| 4.3.2 两种基因(人源、合成)的比较 | 第68-69页 |
| 4.3.3 串联基因对重组菌生长及质粒稳定性的影响 | 第69-72页 |
| 4.4 小结 | 第72-74页 |
| 第五章 在毕赤酵母及枯草芽孢杆菌中表达人β-防御素-2 | 第74-84页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 材料与方法 | 第74-78页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第74-76页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第78-81页 |
| 5.3.1 在毕赤酵母中表达HBD-2 | 第78-80页 |
| 5.3.2 在枯草芽孢杆菌中表达HBD-2 | 第80-81页 |
| 5.3.3 三种宿主菌表达情况的比较 | 第81页 |
| 5.4 小结 | 第81-84页 |
| 第六章 重组人β-防御素-2的表达优化及放大 | 第84-100页 |
| 6.1 引言 | 第84页 |
| 6.2 材料与方法 | 第84-86页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第84-85页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第85-86页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第86-98页 |
| 6.3.1 培养基的选择 | 第86页 |
| 6.3.2 培养温度的选择 | 第86-89页 |
| 6.3.3 装液量的选择 | 第89页 |
| 6.3.4 诱导剂终浓度的选择 | 第89页 |
| 6.3.5 诱导时机的选择 | 第89-90页 |
| 6.3.6 表达时间的确定 | 第90-91页 |
| 6.3.7 表达载体的改建 | 第91-93页 |
| 6.3.8 表达的放大 | 第93-95页 |
| 6.3.9 重组菌发酵的动力学研究 | 第95-98页 |
| 6.4 小结 | 第98-100页 |
| 第七章 重组人β-防御素-2的分离纯化 | 第100-110页 |
| 7.1 引言 | 第100-101页 |
| 7.2 材料与方法 | 第101-102页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第101页 |
| 7.2.2 实验方法 | 第101-102页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第102-109页 |
| 7.3.1 亲和层析分离融合蛋白 | 第102-104页 |
| 7.3.2 肠激酶裂解融合蛋白 | 第104页 |
| 7.3.3 阳离子交换层析分离重组HBD-2 | 第104-106页 |
| 7.3.4 重组HBD-2的精制 | 第106页 |
| 7.3.5 渗透冲击法提取融合蛋白 | 第106-107页 |
| 7.3.6 分离工艺总结 | 第107-109页 |
| 7.4 小结 | 第109-110页 |
| 第八章 重组人β-防御素-2的活性测定 | 第110-116页 |
| 8.1 引言 | 第110页 |
| 8.2 材料与方法 | 第110-112页 |
| 8.2.1 实验材料 | 第110-111页 |
| 8.2.2 实验方法 | 第111-112页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第112-115页 |
| 8.3.1 固体平板扩散法 | 第112-113页 |
| 8.3.2 液体培养法测定抑菌活性 | 第113页 |
| 8.3.3 抑菌效果与培养时间的关系 | 第113页 |
| 8.3.4 抑菌效果与NaCl浓度的关系 | 第113-115页 |
| 8.4 小结 | 第115-116页 |
| 第九章 在大肠杆菌中表达人β-防御素-3，4 | 第116-122页 |
| 9.1 引言 | 第116页 |
| 9.2 材料与方法 | 第116-118页 |
| 9.2.1 实验材料 | 第116-117页 |
| 9.2.2 实验方法 | 第117-118页 |
| 9.3 结果与讨论 | 第118-120页 |
| 9.3.1 密码子优化 | 第118页 |
| 9.3.2 全基因合成 | 第118-119页 |
| 9.3.3 表达载体的构建 | 第119页 |
| 9.3.4 重组目标蛋白表达 | 第119-120页 |
| 9.4 小结 | 第120-122页 |
| 结论 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 论文发表情况 | 第126页 |
