| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写词 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 胶原蛋白概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 胶原蛋白的种类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 胶原蛋白的组成及结构 | 第13-15页 |
| 1.2 人源Ⅱ型胶原蛋概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 人源Ⅱ型胶原蛋白的生物学功能和应用 | 第15页 |
| 1.2.2 人源Ⅱ型胶原蛋白的生产 | 第15-16页 |
| 1.3 杆状病毒多基因表达系统概述 | 第16-23页 |
| 1.3.1 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第17-18页 |
| 1.3.2 asd缺失型rSw106-inv菌株应用于构建杆状病毒 | 第18-20页 |
| 1.3.3 杆状病毒多基因表达系统 | 第20-23页 |
| 1.4 家蚕生物反应器 | 第23-24页 |
| 1.4.1 家蚕生物反应器的优点 | 第23-24页 |
| 1.4.2 利用家蚕生物反应器表达的外源基因 | 第24页 |
| 1.4.3 家蚕生物反应器的应用前景 | 第24页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、目的基因、细胞系和家蚕 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 人源Ⅱ型胶原蛋白基因ColⅡ的克隆 | 第28-31页 |
| 2.2.2 真核转移载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.3 表达ColⅡ基因重组菌株的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.4 侵染蛋白介导的经济高效生产感染性重组病毒粒子 | 第33-34页 |
| 2.2.5 重组蛋白ColⅡ在Sf9细胞中的表达及检测 | 第34-35页 |
| 2.2.6 Sf9细胞表达重组蛋白ColⅡ的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.7 重组蛋白ColⅡ在BmN细胞中的表达及检测 | 第36页 |
| 2.2.8 重组蛋白ColⅡ在家蚕幼虫中的表达及检测 | 第36页 |
| 2.2.9 家蚕幼虫表达重组ColⅡ蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.10 MTT法测定家蚕幼虫表达重组ColⅡ蛋白的活性 | 第37-38页 |
| 2.2.11 人源Ⅱ型胶原蛋白扫描电镜（SEM）观察 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-57页 |
| 3.1 人源Ⅱ型胶原蛋白基因ColⅡ的克隆 | 第38-40页 |
| 3.1.1 EX-Z5512-B31质粒双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 PCR扩增ColⅡ基因 | 第39-40页 |
| 3.2 pFBDM-polh-ColⅡ-p10-IM真核转移载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.1 pFBDM-p10-IM载体构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 pFBDM-polh-ColⅡ-p10-IM载体构建 | 第41-43页 |
| 3.3 ColⅡ基因重组菌株的构建 | 第43-44页 |
| 3.4 侵染蛋白介导的经济高效生产感染性重组病毒粒子 | 第44-47页 |
| 3.4.1 感染Sf9/BmN细胞重组杆状病毒的制备 | 第44-46页 |
| 3.4.2 TCID50法测定重组病毒的滴度 | 第46-47页 |
| 3.5 目的蛋白ColⅡ在Sf9细胞中的表达及检测 | 第47-49页 |
| 3.5.1 重组蛋白ColⅡ在Sf9细胞中表达及检测 | 第47-48页 |
| 3.5.2 Sf9细胞的表达重组蛋白ColⅡ的免疫荧光检测 | 第48-49页 |
| 3.6 Sf9细胞表达重组ColⅡ蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 3.7 重组蛋白ColⅡ在BmN细胞中的表达及检测 | 第50-51页 |
| 3.8 家蚕幼虫表达重组ColⅡ蛋白的表达及检测 | 第51-53页 |
| 3.9 家蚕幼虫表达重组ColⅡ蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| 3.10 MTT法测定家蚕幼虫表达重组ColⅡ蛋白的活性 | 第55-56页 |
| 3.11 人源Ⅱ型胶原蛋白扫描电镜（SEM）观察 | 第56-57页 |
| 4 讨论与结论 | 第57-63页 |
| 4.1 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1.1 杆状病毒多基因—家蚕幼虫表达系统的优势 | 第57-58页 |
| 4.1.2 重组人源Ⅱ胶原蛋白的稳定性 | 第58-59页 |
| 4.1.3 昆虫细胞表达和家蚕幼虫表达的比较 | 第59-60页 |
| 4.1.4 重组人源Ⅱ型胶原蛋白的纯化工艺 | 第60-61页 |
| 4.2 结论 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 资助项目 | 第75页 |
