| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 前言 | 第9-23页 |
| 1.1 β-内酰胺抗生素的发展历史 | 第9-10页 |
| 1.2 β-内酰胺类抗生素 | 第10-11页 |
| 1.3 β-内酰胺类抗生素的抗菌机制 | 第11-13页 |
| 1.4 β-内酰胺类抗生素的耐药性 | 第13页 |
| 1.5 β-内酰胺酶的发现 | 第13-14页 |
| 1.6 β-内酰胺酶的分类: | 第14-17页 |
| 1.7 β-内酰胺酶的作用机制: | 第17-18页 |
| 1.8 碳青霉烯酶的出现 | 第18-19页 |
| 1.9 β-内酰胺酶抑制剂 | 第19-23页 |
| 第二章 基于已有质粒的β-内酰胺酶的表达 | 第23-41页 |
| 2.1 前言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-30页 |
| 2.3 已有pBAD载体质粒蛋白的表达与纯化 | 第30-37页 |
| 2.3.1 E.coli Top 10感受态细胞阳性检测 | 第30-31页 |
| 2.3.2 pBAD-KPC-3在E.coli Top 10中的表达纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.3 pBAD-KPC-3在E.coli Top 10中的表达结果 | 第32-36页 |
| 2.3.4 pBAD-载体蛋白在E.coli LMG194中蛋白表达 | 第36-37页 |
| 2.3.5 pBAD载体质粒表达总结 | 第37页 |
| 2.4 pET28b-SUMO-NDM-1质粒的构建 | 第37-41页 |
| 2.4.1 pET28b-NDM-1质粒的表达纯化 | 第39-40页 |
| 2.4.2 pET28b-NDM-1表达纯化结果 | 第40页 |
| 2.4.3 NDM-1 β-内酰胺酶表达总结 | 第40-41页 |
| 第三章 新β-内酰胺酶的质粒构建及其表达 | 第41-63页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 实验耗材 | 第41-42页 |
| 3.3 新质粒的构建 | 第42-48页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3.2 连接 | 第43-44页 |
| 3.3.3 将连接好的产物转化到E.coli BL21 (DE3) Rosetta感受态细胞 | 第44页 |
| 3.3.4 新构建pBAD载体质粒结果 | 第44-47页 |
| 3.3.5 新质粒构建的结果与讨论 | 第47-48页 |
| 3.4 新构建pBAD载体CTX-M-9质粒表达纯化 | 第48-50页 |
| 3.4.1 重组pBAD载体CTX-M-9小量表达 | 第48页 |
| 3.4.2 重组pBAD载体β-内酰胺酶大量表达 | 第48-50页 |
| 3.5 CTX-M-9表达表达载体的优化 | 第50-58页 |
| 3.5.1 载体更换后CTX-M-9小量试表达 | 第52-54页 |
| 3.5.2 载体更换后CTX-M-9大量表达 | 第54-58页 |
| 3.5.3 CTX-M-9表达载体优化后总结: | 第58页 |
| 3.6 pBAD载体TEM-3、OXA-48和SHV-18的表达纯化 | 第58-59页 |
| 3.6.1 pBAD载体TEM-3、OXA-48和SHV-18的表达纯化结果 | 第58-59页 |
| 3.7 pET28b载体TEM-3、OXA-48和SHV-18的表达纯化 | 第59-61页 |
| 3.7.1 pET28b载体OXA-48和SHV-18试表达结果 | 第60页 |
| 3.7.2 pET28b载体OXA-48、SHV-18和TEM-3大量表达结果 | 第60-61页 |
| 3.8 新构建β-内酰胺酶质粒的表达总结 | 第61-63页 |
| 第四章 β-内酰胺酶活性研究及其抑制剂的筛选 | 第63-73页 |
| 4.1 前言 | 第63-64页 |
| 4.2 实验材料 | 第64-67页 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器同第二部分 | 第64页 |
| 4.2.2 实验试剂的配制: | 第64-67页 |
| 4.3 β-内酰胺酶活性研究 | 第67-68页 |
| 4.3.1 融合标签对蛋白活性的影响 | 第67页 |
| 4.3.2 融合标签对蛋白活性的影响结果 | 第67页 |
| 4.3.3 β-内酰胺酶的活性研究 | 第67-68页 |
| 4.4 β-内酰胺酶抑制剂筛选体系 | 第68-73页 |
| 4.4.1 酶对荧光探针水解 | 第69-70页 |
| 4.4.2 酶抑制剂筛选体系的建立 | 第70-73页 |
| 全文总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录I:攻读硕±期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 附录II:实验中相关简称及图片 | 第82页 |
