| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的生理特征 | 第13页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌cry基因的表达调控 | 第13-15页 |
| 1.2 Sigma54因子概述 | 第15-17页 |
| 1.2.1 Sigma54因子结构特点和作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Sigma54因子的功能 | 第16-17页 |
| 1.3 增强子结合蛋白概述 | 第17-18页 |
| 1.3.1 增强子结合蛋白的结构 | 第17页 |
| 1.3.2 增强子结合蛋白的功能 | 第17-18页 |
| 1.4 PTS系统概述 | 第18-20页 |
| 1.4.1 革兰氏阴性细菌的PTS系统 | 第20页 |
| 1.4.2 革兰氏阳性细菌的PTS系统 | 第20页 |
| 1.5 细菌中纤维二糖代谢途径 | 第20-21页 |
| 1.5.1 纤维二糖的理化性质和生理意义 | 第20-21页 |
| 1.5.2 细菌中纤维二糖代谢途径 | 第21页 |
| 1.6 立题依据和目的意义 | 第21-23页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.6.2 目的意义 | 第21-23页 |
| 2 材料方法 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第24页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.3.1 PCR模板粗制备 | 第26页 |
| 2.3.2 Bt基因组粗提取 | 第26页 |
| 2.3.3 目的基因的扩增 | 第26-29页 |
| 2.3.4 酶切反应 | 第29页 |
| 2.3.5 目的片段与载体的连接 | 第29页 |
| 2.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| 2.3.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.3.8 大肠杆菌的热激转化及阳性重组子的鉴定 | 第30页 |
| 2.3.9 大肠杆菌质粒的提取 | 第30页 |
| 2.3.10 Bt感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.11 Bt的电击转化及阳性重组子的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.12 序列的测定和分析 | 第31页 |
| 2.3.13 同源重组突变体的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.14 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第32页 |
| 2.3.15 Bt总RNA的提取和纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.16 RT-PCR | 第33页 |
| 2.3.17 SMARTer~(TM) RACE | 第33-34页 |
| 2.3.18 纤维二糖的利用分析 | 第34页 |
| 2.3.19 PTS效率的测定 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-58页 |
| 3.1 cel基因簇的生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 3.2 cel基因簇的转录单元确定 | 第37页 |
| 3.3 cel基因簇的转录起始位点分析 | 第37-39页 |
| 3.4 cel基因簇的突变体构建 | 第39-49页 |
| 3.4.1 目的基因插入突变盒的构建 | 第39-42页 |
| 3.4.2 目的基因突变质粒的构建与鉴定 | 第42-45页 |
| 3.4.3 同源重组缺失目的基因的筛选与验证 | 第45-49页 |
| 3.5 cel基因簇的表达调控 | 第49-54页 |
| 3.5.1 celA基因启动子受Sigma54控制 | 第50页 |
| 3.5.2 celA基因启动子的诱导条件摸索 | 第50-51页 |
| 3.5.3 celA基因启动子的诱导活性受Sigma54控制 | 第51-52页 |
| 3.5.4 CcpA介导葡萄糖对celA基因的启动子抑制作用 | 第52-54页 |
| 3.6 celR基因启动子的调控分析 | 第54-56页 |
| 3.6.1 celR基因的启动子的活性 | 第54-55页 |
| 3.6.2 celR基因启动子的诱导条件摸索 | 第55-56页 |
| 3.7 cel基因簇突变体的表型分析 | 第56-58页 |
| 3.7.1 PTS效率的测定 | 第56页 |
| 3.7.2 突变体对纤维二糖的利用 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-64页 |
| 4.1 cel基因簇在细菌中的分布 | 第58-60页 |
| 4.2 CelR蛋白结构域比对分析及调控 | 第60-61页 |
| 4.3 HD73中cel基因簇的调控模式 | 第61-62页 |
| 4.4 展望 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77页 |
