| 主要缩略词表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 第一章 基于流式分选和单细胞PCR的全人源炭疽保护性抗原单克隆抗体的筛选与鉴定 | 第20-66页 |
| 第一节 重组PA疫苗激发的体液免疫应答水平评价 | 第20-28页 |
| 1. 材料和方法 | 第20-22页 |
| 1.1 材料 | 第20页 |
| 1.2 方法 | 第20-22页 |
| 1.2.1 重组PA疫苗免疫志愿者及血液样品的采集 | 第20页 |
| 1.2.2 血清中PA结合抗体水平及结构域特异性的ELISA检测 | 第20-21页 |
| 1.2.3 血清中PA中和抗体水平的TNA检测 | 第21页 |
| 1.2.4 人外周血单个核细胞的分离 | 第21-22页 |
| 1.2.5 抗体分泌细胞数量的ELISpot检测 | 第22页 |
| 2. 结果 | 第22-26页 |
| 2.1 血清中PA结合抗体水平及结构域特异性检测 | 第22-23页 |
| 2.2 血清中PA中和抗体水平检测 | 第23-24页 |
| 2.3 人外周血单个核细胞的分离 | 第24-25页 |
| 2.4 抗体分泌细胞数量检测 | 第25-26页 |
| 3. 讨论 | 第26-28页 |
| 第二节 流式分选和单细胞PCR快速扩增全人源单克隆抗体基因 | 第28-44页 |
| 1. 材料和方法 | 第28-33页 |
| 1.1 材料 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-33页 |
| 1.2.1 重组PA疫苗免疫志愿者血液样品的采集 | 第28页 |
| 1.2.2 人外周血单个核细胞的分离 | 第28页 |
| 1.2.3 抗体分泌细胞表面抗原的染色 | 第28-29页 |
| 1.2.4 流式细胞仪分选单个抗体分泌细胞 | 第29-30页 |
| 1.2.5 单细胞PCR扩增抗体基因 | 第30-33页 |
| 2. 结果 | 第33-41页 |
| 2.1 人外周血单个核细胞的分离 | 第33页 |
| 2.2 流式分选单个抗体分泌细胞 | 第33-35页 |
| 2.3 单细胞PCR扩增抗体基因 | 第35-41页 |
| 2.3.1 DNA聚合酶种类对单细胞巢式PCR扩增效率的影响 | 第35-37页 |
| 2.3.2 模板量对单细胞巢式PCR扩增效率的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.3 退火温度对单细胞巢式PCR扩增效率的影响 | 第38页 |
| 2.3.4 单细胞PCR高通量扩增单细胞抗体基因 | 第38-41页 |
| 2.4 抗体基因序列分析 | 第41页 |
| 3. 讨论 | 第41-44页 |
| 第三节 全人源PA单克隆抗体的筛选及结构域特异性评价 | 第44-66页 |
| 1. 材料和方法 | 第44-52页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-52页 |
| 1.2.1 单抗基因的线性表达框构建与表达 | 第44-50页 |
| 1.2.2 PA结合单抗的ELISA筛选 | 第50-51页 |
| 1.2.3 PA结合单抗结构域特异性的ELISA测定 | 第51页 |
| 1.2.4 PA63的纯化 | 第51页 |
| 1.2.5 PA中和性单抗的TNA筛选 | 第51-52页 |
| 1.2.6 PA中和抗体、无关抗体、毒素增强抗体的TNA筛选 | 第52页 |
| 1.2.7 抗体与抗原结合的生物膜干涉技术检测 | 第52页 |
| 2. 结果 | 第52-61页 |
| 2.1 线性表达框构建与表达 | 第52-57页 |
| 2.1.1 线性表达框所需基因片段的扩增 | 第53-54页 |
| 2.1.2 模板量对线性表达框扩增效率的影响 | 第54-55页 |
| 2.1.3 退火温度对线性表达框扩增效率的影响 | 第55-56页 |
| 2.1.4 线性表达框转染后抗体的表达量和活性检测 | 第56-57页 |
| 2.2 PA结合单抗、中和性单抗的筛选及单抗结构域特异性鉴定 | 第57-61页 |
| 2.2.1 PA结合单抗的筛选及其结构域特异性鉴定 | 第57-59页 |
| 2.2.2 PA中和性单抗的筛选 | 第59-61页 |
| 3. 讨论 | 第61-66页 |
| 第二章 全人源炭疽保护性抗原中和性单克隆抗体的功能研究 | 第66-91页 |
| 第一节 全人源PA中和性单克隆抗体的中和活性和机制研究 | 第66-82页 |
| 1. 材料和方法 | 第66-69页 |
| 1.1 材料 | 第66页 |
| 1.2 方法 | 第66-69页 |
| 1.2.1 PA中和性单抗表达质粒的构建、表达及纯化 | 第66-67页 |
| 1.2.2 PA中和性单抗亲和力的生物膜干涉技术测定 | 第67-68页 |
| 1.2.3 PA中和性单抗的体外中和活性TNA测定 | 第68页 |
| 1.2.4 PA中和性单抗的体内中和活性大鼠毒素攻毒实验测定： | 第68页 |
| 1.2.5 Furin酶切抑制实验 | 第68-69页 |
| 1.2.6 七聚体形成抑制实验 | 第69页 |
| 2. 结果 | 第69-79页 |
| 2.1 PA中和性单抗表达质粒的构建、表达及纯化 | 第69-71页 |
| 2.1.1 单抗表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| 2.1.2 单抗的表达及纯化 | 第70-71页 |
| 2.2 PA中和性单抗的亲和力测定 | 第71-72页 |
| 2.3 PA中和性单抗的体外中和活性测定 | 第72-73页 |
| 2.4 PA中和性单抗的体内中和活性测定 | 第73-74页 |
| 2.5 Furin酶切抑制实验 | 第74-76页 |
| 2.5.1 不同单位Furin酶对PA83酶切作用的鉴定 | 第74-75页 |
| 2.5.2 PA中和性单抗抑制Furin酶切的鉴定 | 第75-76页 |
| 2.5.3 中和性单抗 8H6抑制Furin酶切的验证 | 第76页 |
| 2.6 七聚体形成抑制实验 | 第76-79页 |
| 2.6.1 PA63的纯化 | 第76-77页 |
| 2.6.2 PA中和性单抗抑制PA七聚体形成的鉴定 | 第77-78页 |
| 2.6.3 中和性单抗 4A3抑制PA七聚体形成的验证 | 第78-79页 |
| 3. 讨论 | 第79-82页 |
| 第二节 全人源PA中和性单克隆抗体的协同作用研究 | 第82-91页 |
| 1. 材料和方法 | 第82-83页 |
| 1.1 材料 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-83页 |
| 1.2.1 PA中和性单抗体外协同作用的TNA测定 | 第82页 |
| 1.2.2 PA中和性单抗体内协同作用的大鼠毒素攻毒实验测定 | 第82-83页 |
| 1.2.3 统计分析和计算 | 第83页 |
| 2. 结果 | 第83-88页 |
| 2.1 中和抗体之间的协同作用分析 | 第83-86页 |
| 2.2 毒素增强抗体与中和抗体的协同作用分析 | 第86-88页 |
| 3. 讨论 | 第88-91页 |
| 结论 | 第91页 |
| 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 附录1抗体序列 | 第96-111页 |
| 附录2主要溶液配制 | 第111-113页 |
| 文献综述 | 第113-123页 |
| 个人简历 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
