| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 NDV分子生物学研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 NDV病原研究 | 第12-14页 |
| 1.1.2 新城疫病毒分子生物学特性 | 第14-18页 |
| 1.1.3 新城疫病毒的转录与复制 | 第18-19页 |
| 1.2 负链RNA病毒反向遗传操作系统 | 第19-26页 |
| 1.2.1 反向遗传学的概念 | 第19页 |
| 1.2.2 反向遗传操作系统原理与方法 | 第19-20页 |
| 1.2.3 RNA病毒反向遗传系统的建立 | 第20-21页 |
| 1.2.4 NDV反向遗传系统的建立 | 第21-22页 |
| 1.2.5 NDV反向遗传学的应用 | 第22-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 细胞、质粒与病毒 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 IRES-RFP亚克隆的构建 | 第28页 |
| 2.2.2 重组质粒p LS-NP-IRES-RFP, pLS-P-IRES-RFP, pLS-M-IRES-RFP, p LS-F-IRES-RFP,p LS-HN-IRES-RFP和pLS-L-IRES-RFP的构建与重组病毒的拯救 | 第28-32页 |
| 2.2.3 拯救病毒r LS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, r LS-M-IRES-RFP, rLS-F-IRES-RFP,r LS-HN-IRES-RFP和rLS-L-IRES-RFP的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.4 重组病毒r LS-NP-IRES-RFP, r LS-P-IRES-RFP, r LS-M-IRES-RFP, r LS-F-IRES-RFP,rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L-IRES-RFP的生物学特性 | 第33-34页 |
| 2.2.5 转录水平检测拯救病毒rLS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, rLS-M-IRES-RFP,rLS-F-IRES-RFP, rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L- IRES- RFP的表达量 | 第34-36页 |
| 2.2.6 蛋白水平检测拯救病毒rLS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, rLS-M-IRES-RFP,rLS-F-IRES-RFP, rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L- IRES- RFP蛋白的表达量 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-61页 |
| 3.1 PCR扩增目的片段的结果 | 第38页 |
| 3.2 重组质粒PLS-NP-IRES-RFP, PLS-P-IRES-RFP, PLS-M-IRES- RFP, PLS-F-IRES-RFP,PLS-HN-IRES-RFP和PLS-L-IRES-RFP的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.1 鉴定重组质粒p LS-NP-IRES-RFP, p LS-P-IRES-RFP, p LS-M-IRES- RFP,pLS-F-IRES-RFP, pLS-HN-IRES-RFP和p LS-L-IRES-RFP的结果 | 第38-41页 |
| 3.3 拯救病毒RLS-NP-IRES-RFP, RLS-P-IRES-RFP, RLS-M-IRES- RFP, RLS-F-IRES-RFP,RLS-HN-IRES-RFP和RLS-L-IRES-RFP的鉴定 | 第41-52页 |
| 3.3.1 拯救病毒r LS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, r LS-M-IRES-RFP, rLS-F-IRES-RFP,rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L-IRES-RFP的血凝（HA）和血凝抑制（HI）鉴定 | 第41页 |
| 3.3.2 拯救病毒r LS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, r LS-M-IRES-RFP, rLS-F-IRES-RFP,rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L-IRES-RFP插入片段测序结果 | 第41-42页 |
| 3.3.3 拯救病毒r LS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, r LS-M-IRES-RFP, rLS-F-IRES-RFP,rLS-HN-IRES-RFP和rLS-L-IRES-RFP蛋白表达的鉴定结果 | 第42-52页 |
| 3.4 拯救病毒RLS-NP-IRES-RFP, RLS-P-IRES-RFP, RLS-M-IRES- RFP, RLS-F-IRES-RFP,RLS-HN-IRES-RFP和RLS-L-IRES-RFP的生物学特性结果 | 第52-53页 |
| 3.5 拯救病毒RLS-NP-IRES-RFP, RLS-P-IRES-RFP, RLS-M-IRES- RFP, RLS-F-IRES-RFP,RLS-HN-IRES-RFP和RLS-L-IRES-RFP的生长曲线结果 | 第53-54页 |
| 3.6 转录水平检测拯救病毒RLS-NP-IRES-RFP, RLS-P-IRES-RFP, RLS-M-IRES-RFP,RLS-F-IRES-RFP, RLS-HN-IRES-RFP和RLS-L- IRES-RFP的表达量的结果 | 第54-61页 |
| 3.6.1 Real-time PCR引物特异性验证试验 | 第54-55页 |
| 3.6.2 Real-time PCR检测不同时间点各拯救病毒RFP基因m RNA表达量的结果 | 第55-57页 |
| 3.6.3 熔解曲线分析结果 | 第57-59页 |
| 3.6.4 蛋白水平检测拯救病毒rLS-NP-IRES-RFP, rLS-P-IRES-RFP, rLS-M-IRES-RFP,r LS-F-IRES-RFP, rLS-HN-IRES-RFP和r LS-L-IRES- RFP的蛋白表达量的结果 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
