| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 主要符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-30页 |
| 1.1 纳他霉素简介 | 第17-21页 |
| 1.1.1 纳他霉素结构与性质 | 第17-20页 |
| 1.1.2 作为生物防腐剂的优点 | 第20-21页 |
| 1.2 纳他霉素应用及前景 | 第21-22页 |
| 1.2.1 在食品中的应用 | 第21页 |
| 1.2.2 在医药中的应用 | 第21页 |
| 1.2.3 其他方面 | 第21-22页 |
| 1.2.4 应用前景 | 第22页 |
| 1.3 纳他霉素的生物合成 | 第22-27页 |
| 1.3.1 纳他霉素的生产菌株 | 第22-23页 |
| 1.3.2 纳他霉素微生物合成基因 | 第23-24页 |
| 1.3.3 纳他霉素生物合成途径 | 第24-27页 |
| 1.4 发酵法制备纳他霉素研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 胆固醇氧化酶对纳他霉素合成的影响 | 第28-29页 |
| 1.5.1 胆固醇氧化酶概述 | 第28页 |
| 1.5.2 胆固醇氧化酶对纳他霉素合成的影响 | 第28-29页 |
| 1.6 本课题研究的主要内容 | 第29页 |
| 1.7 本课题的研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 第二章 高产纳他霉素基因工程菌株的构建 | 第30-49页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第30页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 培养基及溶液的配制 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 ChoD的添加对S.gilvosporeus 712产纳他霉素的影响 | 第32页 |
| 2.2.2 接合转移受体菌的筛选 | 第32页 |
| 2.2.3 DNA的操作 | 第32-38页 |
| 2.2.4 大肠杆菌-放线菌的接合转移 | 第38-39页 |
| 2.2.5 工程菌的确证 | 第39页 |
| 2.2.6 细胞干重测定方法 | 第39页 |
| 2.2.7 纳他霉素含量测定方法 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| 2.3.1 胞外ChoD的添加对S.gilvosporeus 712产纳他霉素的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.2 接合转移受体菌的筛选 | 第41页 |
| 2.3.3 重组载体T-p_(ermE)~*-pimE的构建 | 第41-45页 |
| 2.3.4 重组载体pSET-p_(erm)E~*-pimE的构建 | 第45-47页 |
| 2.3.5 基因工程菌株的构建 | 第47-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 基因工程菌株摇瓶及发酵罐发酵 | 第49-60页 |
| 3.1 材料 | 第49-52页 |
| 3.1.1 菌种 | 第49页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.4 培养基及溶液的配制 | 第50-52页 |
| 3.2 方法 | 第52-55页 |
| 3.2.1 菌种的活化 | 第52页 |
| 3.2.2 S.gilvosporeus swjs-801摇瓶发酵产纳他霉素研究 | 第52页 |
| 3.2.3 S.gilvosporeus swjs-801发酵罐发酵产纳他霉素研究 | 第52页 |
| 3.2.4 含His标签的胆固醇氧化酶的表达检测 | 第52-54页 |
| 3.2.5 胆固醇氧化酶活性的测定方法 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-59页 |
| 3.3.1 建立标准曲线 | 第55-56页 |
| 3.3.2 PimE-His_6的检测 | 第56页 |
| 3.3.3 摇瓶发酵验证PimE过表达对纳他霉素产量的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.4 1-L发酵罐发酵验证PimE过表达对纳他霉素产量的影响 | 第57-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 基因工程菌株发酵条件的优化 | 第60-74页 |
| 4.1 材料 | 第60-62页 |
| 4.1.1 菌种 | 第60页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第61页 |
| 4.1.4 培养基 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 碳源的筛选 | 第62页 |
| 4.2.2 氮源的筛选 | 第62页 |
| 4.2.3 摇瓶装液量的筛选 | 第62页 |
| 4.2.4 Plackett-Burman设计筛选显著性影响因素 | 第62-63页 |
| 4.2.5 正交实验设计用于发酵培养基的优化 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第64-73页 |
| 4.3.1 碳源对纳他霉素发酵的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.2 氮源对纳他霉素发酵的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.3 Plackett-Burman设计筛选显著性影响因素 | 第66-67页 |
| 4.3.4 溶氧量对纳他霉素发酵的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.5 Plackett-Burman设计再次筛选显著性影响因素 | 第68-70页 |
| 4.3.6 正交实验设计优化发酵培养基 | 第70-71页 |
| 4.3.7 优化后摇瓶及1-L发酵罐发酵 | 第71-73页 |
| 4.4 小结 | 第73-74页 |
| 总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第82-83页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第83页 |
