| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第12-26页 |
| 1.1 G蛋白偶联受体研究概况 | 第12-21页 |
| 1.1.1 G蛋白偶联受体的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 G蛋白偶联受体的分类 | 第14-16页 |
| 1.1.3 G蛋白偶联受体与配基作用激活信号通路的机制 | 第16-18页 |
| 1.1.4 G蛋白偶联受体的组成型活性 | 第18-19页 |
| 1.1.5 孤儿G蛋白偶联受体 | 第19页 |
| 1.1.6 解孤孤儿G蛋白偶联受体策略及意义 | 第19-21页 |
| 1.2 白介素-6 研究概况 | 第21-26页 |
| 1.2.1 大肠杆菌中表达系统表达异源蛋白质概况 | 第21页 |
| 1.2.2 白介素-6 简介 | 第21-22页 |
| 1.2.3 白介素-6 与疾病 | 第22-24页 |
| 1.2.4 白介素-6 的研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 孤儿G蛋白偶联受体库的构建 | 第26-41页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.3.1 构建诱导表达型的C-端携带EGFP标签人源孤儿GPCR库 | 第27-34页 |
| 2.3.2 构建诱导表达型的N-端携带FAP标签人源孤儿GPCR库 | 第34-35页 |
| 2.3.3 将GPCR基因克隆到pcDNA6 载体中得到pcDNA6-GPCR重组质粒 | 第35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-39页 |
| 2.4.1 pTRE-3G-BI-EGFP载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.4.2 GPCR基因的扩增与pTRE-3G-BI-GPCR-EGFP重组质粒和pTRE-3G-BI-FAP-GPCR重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 2.4.3 将GPCR基因克隆到pCDNA6 载体中得到pCDNA6-GPCR重组质粒 | 第39页 |
| 2.5 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 重要蛋白激素受体的筛选 | 第41-49页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 重要的蛋白激素 | 第41-42页 |
| 3.3.2 荧光显微镜定性观察可控表达的GPCR受体在膜上的分布以及内吞 | 第42-43页 |
| 3.3.3 定量检测GPCR受体与配体结合胞内cAMP水平的变化 | 第43页 |
| 3.3.4 定量检测G蛋白偶联受体激活SRE信号通路 | 第43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-47页 |
| 3.4.1 荧光显微镜定性观察GPCR受体在膜上的分布以及内吞 | 第43-44页 |
| 3.4.2 定量检测GPCR受体与配体结合引起的胞内cAMP水平的变化 | 第44-46页 |
| 3.4.3 定量检测G蛋白偶联受体激活SRE信号通路 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 人源白介素6的优化表达 | 第49-59页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第49-50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-51页 |
| 4.3.1 pNLuc/IL-6 的质粒的构建 | 第50页 |
| 4.3.2 NanoLuc-IL-6 在大肠杆菌中过表达和纯化 | 第50页 |
| 4.3.3 NanoLuc-IL-6 融合蛋白的肠激酶切割 | 第50-51页 |
| 4.3.4 圆二色谱测量 | 第51页 |
| 4.3.5 IL-6 的生物活性测定 | 第51页 |
| 4.4 实验结果 | 第51-58页 |
| 4.4.1 NanoLuc-IL-6 融合蛋白在大肠杆菌中的过表达和纯化 | 第51-55页 |
| 4.4.2 从 6×His-NanoLuc-IL-6 融合蛋白制备成熟的IL-6 蛋白 | 第55-57页 |
| 4.4.3 CD光谱研究 | 第57-58页 |
| 4.4.4 活性测定 | 第58页 |
| 4.5 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 实验总结 | 第59页 |
| 5.2 展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
