中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
缩略词表 | 第11-13页 |
1 前言 | 第13-30页 |
1.1 研究问题的由来 | 第13-14页 |
1.2 文献综述 | 第14-28页 |
1.2.1 Callipyge及其研究进展 | 第14-26页 |
1.2.2 DLK1-GTL2区域相关miRNA的研究进展 | 第26-28页 |
1.3 研究目的和意义 | 第28-30页 |
2 材料与方法 | 第30-46页 |
2.1 本研究的技术路线 | 第30页 |
2.2 材料 | 第30-37页 |
2.2.1 样品 | 第30页 |
2.2.2 用于DLK1亲和力评估的DLK1-GTL2区域miRNA模拟物 | 第30-37页 |
2.2.3 用于DLK1亲和力评估的DLK1的转录本序列 | 第37页 |
2.2.4 构建GTL2表达载体的GTL2转录本序列 | 第37页 |
2.3 方法 | 第37-46页 |
2.3.1 绵羊DLK1基因的RACE扩增 | 第37-38页 |
2.3.2 表达载体的构建 | 第38-39页 |
2.3.3 miRNA模拟物系统的选择 | 第39-40页 |
2.3.4 miRNA模拟物的分子设计 | 第40-42页 |
2.3.5 模拟物序列的选择 | 第42-43页 |
2.3.6 细胞培养和瞬时转染 | 第43页 |
2.3.7 双荧光Western blotting | 第43-44页 |
2.3.8 DLK1蛋白的去糖基化处理 | 第44-45页 |
2.3.9 DLK1转录本的Northern blot分析 | 第45页 |
2.3.10 miRNA对DLK1亲和力的计算 | 第45-46页 |
3 结果 | 第46-68页 |
3.1 绵羊DLK1基因C2转录本的表达载体的构建和鉴定 | 第46-52页 |
3.2 成熟miRNA表达的设计 | 第52页 |
3.3 DLK1-GTL2区域单个miRNA对DLK1亲和力的测定 | 第52-65页 |
3.4 121个miRNA对DLK1亲和力评估结果的生物学相关性 | 第65-66页 |
3.5 GTL2对DLK1的可能调控作用研究 | 第66-68页 |
4 讨论 | 第68-72页 |
4.1 DLK1双荧光western blot检测方法的建立 | 第68-69页 |
4.2 DLK1-GTL2印记区域miRNA的功能分析 | 第69-70页 |
4.3 DLK1-GTL2区域的miRNA中对DLK1亲和力的研究 | 第70-72页 |
5 结论 | 第72-74页 |
5.1 本论文的主要研究结果及结论 | 第72-73页 |
5.2 本研究的创新点与特色 | 第73页 |
5.3 本研究的不足之处及值得进一步研究的问题 | 第73-74页 |
6 其它工作:猪TCAP基因的克隆与表达谱分析 | 第74-84页 |
6.1 文献综述 | 第74-76页 |
6.1.1 骨骼肌形成过程中的肌节组装 | 第74-75页 |
6.1.2 TCAP基因研究进展 | 第75-76页 |
6.2 材料与方法 | 第76-79页 |
6.2.1 材料 | 第76-77页 |
6.2.2 方法 | 第77-79页 |
6.3 结果 | 第79-82页 |
6.3.1 猪TCAP基因的分子克隆和鉴定 | 第79页 |
6.3.2 猪TCAP基因的表达谱分析 | 第79-81页 |
6.3.3 猪TCAP基因多态性和等位基因频率的检测 | 第81-82页 |
6.4 讨论 | 第82-84页 |
参考文献 | 第84-100页 |
致谢 | 第100-102页 |
附录1:p3.1M-DLK1-HA表达载体中转录形成的RNA序列 | 第102-104页 |
附录2:构建GTL2表达载体的绵羊GTL2序列 | 第104-105页 |
附录3:表1说明 | 第105-106页 |
附录4:表3说明 | 第106-107页 |