| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 参考文献 | 第18-20页 |
| 第一部分 实验研究 | 第20-61页 |
| 第一章 阿尔巴斯绒山羊毛乳头细胞与血管内皮细胞的分离培养及鉴定 | 第20-31页 |
| 1. 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 实验仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.2 实验材料 | 第21页 |
| 1.3 实验试剂及耗材 | 第21页 |
| 1.4 实验液体 | 第21页 |
| 2. 方法 | 第21-24页 |
| 2.1 毛乳头细胞培养 | 第21页 |
| 2.2 血管内皮细胞培养 | 第21-24页 |
| 2.2.1 血管内皮细胞的分离培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 血管内皮细胞传代培养 | 第22-23页 |
| 2.2.3 血管内皮细胞冻存 | 第23页 |
| 2.2.4 血管内皮细胞复苏 | 第23页 |
| 2.2.5 血管内皮细胞的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.6 血管内皮细胞的纯度检测 | 第24页 |
| 3. 结果 | 第24-29页 |
| 3.1 毛乳头细胞培养 | 第24-25页 |
| 3.1.1 毛乳头细胞复苏 | 第24页 |
| 3.1.2 毛乳头细胞培养 | 第24-25页 |
| 3.1.3 毛乳头细胞传代 | 第25页 |
| 3.2 血管内皮细胞培养 | 第25-29页 |
| 3.2.1 血管内皮细胞的分离培养 | 第25-26页 |
| 3.2.2 血管内皮细胞的传代培养 | 第26页 |
| 3.2.3 血管内皮细胞的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.4 血管内皮细胞的纯度检测 | 第27-29页 |
| 4. 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV转染毛乳头细胞及鉴定 | 第31-42页 |
| 1. 材料 | 第31-32页 |
| 1.1 实验仪器设备 | 第31页 |
| 1.2 实验样品 | 第31页 |
| 1.3 实验试剂及耗材 | 第31-32页 |
| 2. 方法 | 第32-37页 |
| 2.1 毛乳头细胞G418浓度的测定 | 第32页 |
| 2.2 表达载体pCDsRed2-KV与pCDsRed2的提取 | 第32页 |
| 2.3 pCDsRed2-KV与pCDsRed2转染毛乳头细胞 | 第32-34页 |
| 2.3.1 Lipo剂量与DNA剂量的优化实验 | 第32-34页 |
| 2.3.2 脂质体介导pCDsRed2-KV转染毛乳头细胞 | 第34页 |
| 2.4 表达载体pCDsRed2-KV与pCDsRed2转染毛乳头细胞的鉴定 | 第34-37页 |
| 2.4.1 PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.2 实时荧光定量PCR鉴定 | 第35-37页 |
| 3. 结果 | 第37-41页 |
| 3.1 毛乳头细胞G418敏感度测定 | 第37页 |
| 3.2 pCDsRed2-KV与pCDsRed2的线性化与纯化 | 第37-38页 |
| 3.3 Lipo剂量与DNA剂量对转染效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.4 转基因毛乳头细胞克隆的筛选 | 第39页 |
| 3.5 转基因毛乳头细胞克隆的鉴定 | 第39-41页 |
| 3.5.1 PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5.2 实时荧光PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 毛乳头细胞与血管内皮细胞之间相互作用影响的研究 | 第42-56页 |
| 1. 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 实验仪器设备 | 第42页 |
| 1.2 实验材料 | 第42页 |
| 1.3 实验试剂及耗材 | 第42-43页 |
| 1.4 实验液体 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-47页 |
| 2.1 毛乳头细胞对血管内皮细胞的影响 | 第43-47页 |
| 2.1.1 毛乳头细胞在血管内皮细胞培养液中的生长状况测定 | 第43页 |
| 2.1.2 Transwell共培养模型的建立及共培养后血管内皮细胞的检测 | 第43-44页 |
| 2.1.3 添加细胞因子对血管内皮细胞生长状况的影响及其检测 | 第44-45页 |
| 2.1.4 添加细胞因子对血管内皮细胞形成管腔样结构的影响 | 第45-47页 |
| 2.2 转基因毛乳头细胞对自身的影响 | 第47页 |
| 2.2.1 转基因毛乳头细胞的生长状况比较 | 第47页 |
| 2.2.2 添加VEGF164细胞因子的毛乳头细胞生长状况比较 | 第47页 |
| 3. 结果 | 第47-54页 |
| 3.1 毛乳头细胞在血管内皮细胞培养液中的生长状况 | 第47-48页 |
| 3.2 Transwell共培养对血管内皮细胞的影响 | 第48-49页 |
| 3.3 添加细胞因子对血管内皮细胞生长的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.1 添加不同浓度的VEGF164细胞因子对血管内皮细胞生长状况的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.2 添加不同浓度的VEGFD细胞因子对血管内皮细胞生长状况的影响 | 第50页 |
| 3.3.3 添加VEGF164、VEGFD对血管内皮细胞生长影响的比较 | 第50-51页 |
| 3.4 培养液中添加VEGF164对血管内皮细胞的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 添加细胞因子对血管内皮细胞形成管腔样结构的影响 | 第52-53页 |
| 3.5.1 基质胶浓度与细胞密度对血管内皮细胞管腔样结构形成的影响 | 第52页 |
| 3.5.2 添加VEGF164、VEGFD细胞因子对血管内皮细胞管腔样结构形成的影响 | 第52-53页 |
| 3.6 初级毛囊毛乳头细胞不同条件的生长状况比较 | 第53-54页 |
| 3.7 次级毛囊毛乳头细胞不同条件的生长状况比较 | 第54页 |
| 4. 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 第二部分 文献综述 毛乳头细胞与血管内皮细胞的研究进展 | 第61-73页 |
| 一、毛囊毛乳头细胞 | 第61-62页 |
| 二、毛乳头细胞的分离方法 | 第62-63页 |
| 1 胶原酶消化法 | 第62页 |
| 2 二步酶消化法 | 第62-63页 |
| 3 酶和机械结合分离法 | 第63页 |
| 三、血管及血管内皮细胞 | 第63-64页 |
| 四、血管内皮细胞的分离方法 | 第64页 |
| 五、毛囊与血管相互作用关系 | 第64-65页 |
| 六、细胞共培养 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
