摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
1 文献综述 | 第11-20页 |
1.1 果实中糖成分 | 第12页 |
1.2 果实糖代谢 | 第12-16页 |
1.2.1 蔗糖的生物合成及分解 | 第12-15页 |
1.2.1.1 蔗糖合成酶(Sucrose synthase,SS) | 第12-13页 |
1.2.1.2 磷酸蔗糖合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS) | 第13-14页 |
1.2.1.3 转化酶(Invertase,Ivr) | 第14-15页 |
1.2.2 淀粉的生物分解 | 第15-16页 |
1.3 RACE技术 | 第16-18页 |
1.3.1 RACE原理 | 第16-17页 |
1.3.2 RACE技术优缺点 | 第17页 |
1.3.3 RACE技术的改进 | 第17-18页 |
1.4 菠萝蜜蔗糖合成酶相关基因的克隆 | 第18-20页 |
2 菠萝蜜蔗糖合成酶AhSS2基因的全长克隆及生物信息学分析 | 第20-34页 |
2.1 实验材料 | 第20页 |
2.2 实验仪器 | 第20页 |
2.3 实验方法 | 第20-26页 |
2.3.1 菠萝蜜果实RNA的提取 | 第20-21页 |
2.3.2 RNA质量和浓度的检测 | 第21页 |
2.3.3 引物的设计 | 第21页 |
2.3.4 cDNA的合成 | 第21-22页 |
2.3.5 菠萝蜜AhSS2基因 3,RACE快速扩增 | 第22-23页 |
2.3.6 菠萝蜜AhSS2基因 5,RACE快速扩增 | 第23页 |
2.3.7 PCR扩增产物的回收纯化 | 第23页 |
2.3.8 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
2.3.9 pMD-19T载体连接反应 | 第24页 |
2.3.10 载体转化反应 | 第24-25页 |
2.3.11 菠萝蜜AhSS2基因全长的获取 | 第25-26页 |
2.4 结果与分析 | 第26-34页 |
2.4.1 菠萝蜜果实RNA的提取 | 第26页 |
2.4.2 菠萝蜜AhSS2基因 3,末端扩增 | 第26页 |
2.4.3 菠萝蜜AhSS2基因 5,末端扩增 | 第26页 |
2.4.4 菠萝蜜AhSS2基因的cDNA序列分析 | 第26-27页 |
2.4.5 菠萝蜜AhSS2基因的全长序列分析 | 第27页 |
2.4.6 菠萝蜜蔗糖合成酶AhSS2基因的核苷酸相似性分析 | 第27页 |
2.4.7 菠萝蜜蔗糖合成酶AhSS2基因的核苷酸分子进化树的构建 | 第27页 |
2.4.8 菠萝蜜蔗糖合成酶AhSS2基因的氨基酸相似性分析 | 第27-28页 |
2.4.9 菠萝蜜蔗糖合成酶AhSS2基因的氨基酸分子进化树的构建 | 第28-29页 |
2.4.10 编码蛋白的理化性质分析 | 第29页 |
2.4.11 编码蛋白的结构域分析 | 第29页 |
2.4.12 编码蛋白的功能位点分析 | 第29-30页 |
2.4.13 编码蛋白的疏水性分析 | 第30页 |
2.4.14 编码蛋白的信号肽分析 | 第30-31页 |
2.4.15 编码蛋白的跨膜区分析 | 第31页 |
2.4.16 编码蛋白的二级结构分析 | 第31-32页 |
2.4.17 编码蛋白的三级结构分析 | 第32-34页 |
3 蔗糖合成酶基因部分序列的多态性分析 | 第34-48页 |
3.1 实验材料 | 第34页 |
3.2 实验仪器 | 第34页 |
3.3 实验方法 | 第34-37页 |
3.3.1 菠萝蜜叶片DNA的提取 | 第34-35页 |
3.3.2 DNA质量和浓度的检测 | 第35-36页 |
3.3.3 引物的设计 | 第36页 |
3.3.4 蔗糖合成酶外显子及内含子序列的扩增 | 第36-37页 |
3.3.5 PCR产物的回收纯化、载体连接及克隆等 | 第37页 |
3.4 结果与分析 | 第37-48页 |
3.4.1 菠萝蜜叶片DNA的提取 | 第37页 |
3.4.2 DNA快速扩增 | 第37页 |
3.4.3 菠萝蜜蔗糖合成酶基因的种质间外显子序列多态性分析 | 第37-40页 |
3.4.4 基于菠萝蜜蔗糖合成酶基因外显子种质聚类分析 | 第40-44页 |
3.4.5 菠萝蜜蔗糖合成酶基因的种质间内含子序列多态性分析 | 第44-46页 |
3.4.6 基于菠萝蜜蔗糖合成酶基因内含子种质聚类分析 | 第46-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
4.1 菠萝蜜AhSS2基因的cDNA全长克隆 | 第48页 |
4.2 菠萝蜜AhSS2基因的起源与进化 | 第48-49页 |
4.3 菠萝蜜种质间外显子的多态性分析 | 第49页 |
4.3.1 外显子序列多态性在遗传多样性分析中的应用 | 第49页 |
4.3.2 外显子序列多态性对酶功能的影响 | 第49页 |
4.4 菠萝蜜种质间内含子序列的多态性分析 | 第49-51页 |
5 结论 | 第51-53页 |
参考文献 | 第53-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
作者简介 | 第62-63页 |
导师简介 | 第63页 |