| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩写符号 | 第13-15页 |
| 第1章 综述 | 第15-29页 |
| 1.1 玫瑰孢链霉菌Streptomyces roseosporus | 第15-19页 |
| 1.1.1 概述 | 第15页 |
| 1.1.2 玫瑰孢链霉菌 | 第15-16页 |
| 1.1.3 S. roseosporus次级代谢及沉默基因簇 | 第16-17页 |
| 1.1.4 次级代谢产物——达托霉素 | 第17-19页 |
| 1.2 影响达托霉素产量的关键基因 | 第19-22页 |
| 1.2.1 概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 S. roseosporus中调控达托霉素合成的结构基因dptE | 第20-21页 |
| 1.2.3 影响达托霉素产量的调控基因dptR2、dptR3 | 第21页 |
| 1.2.4 转录水平上对达托霉素合成起到调控作用的基因atrA | 第21-22页 |
| 1.3 核糖体工程 | 第22-23页 |
| 1.4 精氨酸抑制基因argR | 第23-26页 |
| 1.4.1 概述 | 第23-24页 |
| 1.4.2 ArgR研究现状 | 第24-25页 |
| 1.4.3 S. roseosporus中ArgR | 第25-26页 |
| 1.4.4 ArgR研究进展 | 第26页 |
| 1.5 蛋白质组学 | 第26-27页 |
| 1.6 本实验的研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第29-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-36页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第29-30页 |
| 2.1.2 引物 | 第30-31页 |
| 2.1.3 本文中所用的抗生素及工作浓度 | 第31-32页 |
| 2.1.4 培养基 | 第32-34页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-55页 |
| 2.2.1 大肠杆菌的培养及保藏 | 第36页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第36页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒的快速提取确定重组菌株的阳性克隆 | 第36页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| 2.2.5 DNA的酶切反应 | 第37页 |
| 2.2.6 载体和DNA片段的连接反应 | 第37-38页 |
| 2.2.7 蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 2.2.8 蛋白样品的处理 | 第38-39页 |
| 2.2.9 蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.2.10 可溶蛋白脱盐及超滤浓缩 | 第40-41页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE电泳检测 | 第41-43页 |
| 2.2.12 玫瑰孢链霉菌基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.13 从S. roseosporus Fosmid文库中筛选含有目的基因的Fosmid | 第44页 |
| 2.2.14 S. roseosporus中PCR-targeting系统 | 第44-46页 |
| 2.2.15 接合转移 | 第46-47页 |
| 2.2.16 玫瑰孢链霉菌RNA的提取 | 第47页 |
| 2.2.17 RNA的纯化 | 第47-48页 |
| 2.2.18 PCR扩增 | 第48-49页 |
| 2.2.19 RNA逆转录 | 第49页 |
| 2.2.20 半定量PCR | 第49页 |
| 2.2.21 实时荧光定量PCR（RT-qPCR） | 第49-50页 |
| 2.2.22 发酵液生物活性的检测 | 第50-51页 |
| 2.2.23 生长曲线及产素曲线的测定 | 第51页 |
| 2.2.24 EMSA实验 | 第51-53页 |
| 2.2.26 序列分析工具 | 第53-55页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第55-72页 |
| 3.1 S. roseosporus中精氨酸抑制因子argR的确定与分析 | 第55-57页 |
| 3.2 含有argR基因Fosmid质粒的筛选 | 第57页 |
| 3.3 argR突变菌株的构建与筛选 | 第57-58页 |
| 3.3.1 敲除载体的构建 | 第57页 |
| 3.3.2 敲除载体及敲除株的验证 | 第57-58页 |
| 3.4 遗传互补载体及互补菌株的构建及筛选 | 第58-59页 |
| 3.5 过表达载体及过表达株的构建和筛选 | 第59-60页 |
| 3.6 ArgR蛋白表达载体的筛选及可溶蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| 3.7 argR对发育分化的影响 | 第61-63页 |
| 3.7.1 不同培养基中观察野生型及突变株的生长情况 | 第61-62页 |
| 3.7.2 扫描电镜观察菌丝发育情况 | 第62-63页 |
| 3.8 argR对次级代谢抗生素生物合成的影响 | 第63-66页 |
| 3.8.1 argR生长曲线测定 | 第63-64页 |
| 3.8.2 argR敲除对A21978C生物活性的影响 | 第64-66页 |
| 3.9 argR对精氨酸生物合成基因簇转录影响 | 第66页 |
| 3.10 argR对调控达托霉素合成基因的调控作用 | 第66-67页 |
| 3.11 氨基酸含量的检测 | 第67-68页 |
| 3.12 S. roseosporus中argR对沉默基因簇转录水平影响 | 第68-69页 |
| 3.13 EMSA实验 | 第69-72页 |
| 第4章 讨论 | 第72-76页 |
| 4.1 S. roseosporus中argR的确定 | 第72页 |
| 4.2 S. roseosporus中argR的功能 | 第72-76页 |
| 4.2.1 S. roseosporus中argR对菌丝发育分化的影响 | 第73页 |
| 4.2.2 S. roseosporus中argR对达托霉素生物合成的影响 | 第73-74页 |
| 4.2.3 S. roseosporus中argR对调控达托霉素合成关键基因转录水平影响 | 第74-75页 |
| 4.2.4 S. roseosporus中argR对调控精氨酸基因簇转录的影响 | 第75页 |
| 4.2.5 S. roseosporus中argR对沉默基因簇转录水平影响 | 第75-76页 |
| 第5章 总结 | 第76-78页 |
| 5.1 总结 | 第76页 |
| 5.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 硕士期间发表论文和奖励情况 | 第86页 |
