| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 植物miRNAs的概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 植物miRNAs的发现 | 第10页 |
| 1.1.2 植物miRNAs的生物合成 | 第10-12页 |
| 1.1.3 植物miRNAs的作用机制 | 第12页 |
| 1.1.4 miRBase数据库 | 第12-13页 |
| 1.1.5 miRNA靶基因的预测和鉴定 | 第13-14页 |
| 1.2 植物miRNAs功能研究 | 第14-16页 |
| 1.3 拟南芥miR319及其靶基因研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 AtmiR319基因概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 AtmiR319靶基因TCP研究 | 第17-20页 |
| 2 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 3 实验材料与方法 | 第22-48页 |
| 3.1 实验试剂与仪器 | 第22-26页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 3.1.3 各类抗生素和激素配制 | 第23-24页 |
| 3.1.4 各类培养基 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3.2 基本实验方法 | 第26-32页 |
| 3.2.1 植物材料的种植 | 第26页 |
| 3.2.2 CTAB法抽提矮牵牛基因组DNA | 第26页 |
| 3.2.3 矮牵牛总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.4 第一链cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 3.2.5 连接产物转化大肠杆菌、PCR鉴定及测序分析 | 第28-30页 |
| 3.2.6 农杆菌介导的遗传转化 | 第30-32页 |
| 3.3 矮牵牛PhTCP5和PhTCP6的克隆与组织表达分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 基因克隆的引物设计 | 第32页 |
| 3.3.2 RACE技术克隆5’-端和3’-端cDNA序列 | 第32-33页 |
| 3.3.3 hi-TAIL扩增启动子 | 第33页 |
| 3.3.4 全长拼接 | 第33-34页 |
| 3.3.5 生物信息学分析 | 第34页 |
| 3.3.6 荧光定量PCR分析 | 第34页 |
| 3.3.7 荧光定量PCR引物设计及退火温度筛选 | 第34页 |
| 3.3.8 荧光定量分析的程序 | 第34-35页 |
| 3.4 拟南芥miR319a超量表达研究 | 第35-39页 |
| 3.4.1 植物超表达载体构建 | 第35页 |
| 3.4.2 大肠杆菌菌液质粒提取 | 第35页 |
| 3.4.3 质粒酶切 | 第35-36页 |
| 3.4.4 酶切产物连接 | 第36页 |
| 3.4.5 转基因植株检测 | 第36页 |
| 3.4.6 转基因植株T_0代的表型观察 | 第36-37页 |
| 3.4.7 转基因植株T_1代的表型分析 | 第37-39页 |
| 3.5 miR319对靶基因PhTCP5和PhTCP6的作用方式 | 第39-43页 |
| 3.5.1 miR319对靶基因的预测 | 第39页 |
| 3.5.2 RLM-5'RACE验证miR319对靶基因的剪切 | 第39页 |
| 3.5.3 5’端接头连接 | 第39-40页 |
| 3.5.4 Ligated cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| 3.5.5 Outer PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.5.6 Nested PCR扩增 | 第42页 |
| 3.5.7 qRT-PCR分析miR319对靶基因的剪切 | 第42-43页 |
| 3.6 抗miR319剪切的PhTCP5和PhTCP6突变基因的表达研究 | 第43-48页 |
| 3.6.1 PhTCP5和PhTCP6突变超表达载体构建 | 第44-46页 |
| 3.6.2 突变超表达载体构建 | 第46-48页 |
| 4 结果与分析 | 第48-68页 |
| 4.1 PhTCP5和PhTCP6的克隆和组织表达分析 | 第48-53页 |
| 4.1.1 PhTCP5和PhTCP6基因全长克隆 | 第48-50页 |
| 4.1.2 PhTCP5和PhTCP6基因进化树分析 | 第50页 |
| 4.1.3 PhTCP5和PhTCP6组织表达分析 | 第50-53页 |
| 4.2 AtmiR319a基因超量表达研究 | 第53-61页 |
| 4.2.1 AtmiR319a植物超表达载体构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 AtmiR319a农杆菌介导的遗传转化 | 第54-55页 |
| 4.2.3 转基因植株T_0代表型观察和分析 | 第55-57页 |
| 4.2.4 转基因植株T_1代表型观察和分析 | 第57-61页 |
| 4.3 miR319靶基因的预测、验证和定量分析 | 第61-63页 |
| 4.4 抗miR319剪切的PhTCP5和PhTCP6突变基因的表达 | 第63-68页 |
| 4.4.1 突变序列的获得 | 第63-64页 |
| 4.4.2 PhTCP5和PhTCP6突变基因植物表达载体构建及遗传转化 | 第64-66页 |
| 4.4.3 PhTCP5和PhTCP6突变转基因植株的T0代田间性状分析 | 第66-68页 |
| 5 结果与讨论 | 第68-72页 |
| 5.1 结果 | 第68-69页 |
| 5.2 讨论 | 第69-72页 |
| 5.2.1 miR319对靶基因PhTCP5和PhTCP6的调控 | 第69页 |
| 5.2.2 超表达AtmiR319a对矮牵牛叶形态发育的影响 | 第69-70页 |
| 5.2.3 超表达AtmiR319a对矮牵牛花形态发育的影响 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
