| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 术语及符号说明 | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-31页 |
| 1.1 α-半乳糖苷酶研究概况 | 第14-23页 |
| 1.1.1 α-半乳糖苷酶的来源 | 第14-16页 |
| 1.1.2 α-半乳糖苷酶的分类 | 第16页 |
| 1.1.3 α-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第16-21页 |
| 1.1.3.1 α-半乳糖苷酶的酶催化特性 | 第16-18页 |
| 1.1.3.2 α-半乳糖苷酶的转糖基作用 | 第18-21页 |
| 1.1.3.3 α-半乳糖苷酶的酶活测定方法 | 第21页 |
| 1.1.4 α-半乳糖苷酶的结构与功能 | 第21-23页 |
| 1.2 α-半乳糖苷酶的应用 | 第23-27页 |
| 1.2.1 α-半乳糖苷酶在饲料工业中的应用 | 第23-24页 |
| 1.2.2 α-半乳糖苷酶在食品工业中的应用 | 第24页 |
| 1.2.2.1 α-半乳糖苷酶在制糖工业中的应用 | 第24页 |
| 1.2.2.2 α-半乳糖苷酶在豆奶加工中的应用 | 第24页 |
| 1.2.3 α-半乳糖苷酶在造纸工业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.2.4 α-半乳糖苷酶在医疗领域中的应用 | 第25-26页 |
| 1.2.4.1 α-半乳糖苷酶与异种器官移植 | 第25页 |
| 1.2.4.2 α-半乳糖苷酶与法布里氏(Fabry’s)综合征的治疗 | 第25页 |
| 1.2.4.3 α-半乳糖苷酶在B→O血型转换中的应用 | 第25-26页 |
| 1.2.5 α-半乳糖苷酶转糖基作用的应用 | 第26-27页 |
| 1.2.5.1 α-半乳糖苷酶在环糊精改造中的应用 | 第26页 |
| 1.2.5.2 α-半乳糖苷酶在促进益生菌生长中的应用 | 第26页 |
| 1.2.5.3 α-半乳糖苷酶转糖基在其他领域的应用 | 第26-27页 |
| 1.3 α-半乳糖苷酶基因的克隆方法 | 第27-28页 |
| 1.3.1 基因组文库克隆 | 第27页 |
| 1.3.2 TAIL-PCR方法 | 第27-28页 |
| 1.3.3 高通量基因组测序 | 第28页 |
| 1.4 α-半乳糖苷酶的异源表达 | 第28-29页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统 | 第28-29页 |
| 1.4.2 酵母表达系统 | 第29页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 1.6 研究内容 | 第30-31页 |
| 第2章 重组α-半乳糖苷酶的基因表达、纯化及酶学性质 | 第31-88页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第31页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第32-33页 |
| 2.1.5 常用培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.6 DNA测序与引物合成 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-48页 |
| 2.2.1 感受态的制备 | 第34页 |
| 2.2.2 序列分析 | 第34-35页 |
| 2.2.3 原核表达载体的 | 第35-38页 |
| 2.2.3.1 agaAJB07的全长扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.3.2 agaAHJG4的全长扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.3.3 agaAHJ8的全长扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.3.4 连接 | 第38页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第38-39页 |
| 2.2.5 重组酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第39页 |
| 2.2.6 重组酶的纯化和鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.7 重组酶的定量 | 第41-42页 |
| 2.2.8 酶活测定方法 | 第42-43页 |
| 2.2.9 酶学特性分析 | 第43-48页 |
| 2.2.9.1 纯化的rAgaAJB07的酶学特性分析 | 第44-45页 |
| 2.2.9.2 纯化的rAgaAHJG4的酶学特性分析 | 第45-46页 |
| 2.2.9.3 纯化的rAgaAHJ8的酶学特性分析 | 第46-48页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第48-83页 |
| 2.3.1 agaAJB07的序列分析 | 第48-51页 |
| 2.3.2 agaAHJG4的序列分析 | 第51-55页 |
| 2.3.3 agaAHJ8的序列分析 | 第55-58页 |
| 2.3.4 重组AgaAJB07的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第58-66页 |
| 2.3.4.1 agaAJB07的全长扩增及原核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 2.3.4.2 重组质粒pEASY-E2/agaAJB07的转化 | 第59页 |
| 2.3.4.3 重组酶AgaAJB07在大肠杆菌中的诱导表达 | 第59-60页 |
| 2.3.4.4 重组酶AgaAJB07的纯化和鉴定 | 第60-61页 |
| 2.3.4.5 重组酶AgaAJB07的酶学性质研究 | 第61-66页 |
| 2.3.5 重组AgaAHJG4的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第66-74页 |
| 2.3.5.1 agaAHJG4的全长扩增及原核表达载体的构建 | 第66页 |
| 2.3.5.2 重组质粒pEASY-E2/agaAHJG4的转化 | 第66-67页 |
| 2.3.5.3 重组酶AgaAHJG4在大肠杆菌中的诱导表达 | 第67页 |
| 2.3.5.4 重组酶AgaAHJG4的纯化和鉴定 | 第67-69页 |
| 2.3.5.5 重组α-半乳糖苷酶AgaAHJG4的酶学性质研究 | 第69-74页 |
| 2.3.6 重组AgaAHJ8的基因表达、纯化及酶学性质研究 | 第74-83页 |
| 2.3.6.1 agaAHJ8的全长扩增及原核表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 2.3.6.2 重组质粒pEASY-E2/agaAHJ8的转化 | 第75页 |
| 2.3.6.3 重组酶AgaAHJ8在大肠杆菌中的诱导表达 | 第75页 |
| 2.3.6.4 重组酶AgaAHJ8的纯化和鉴定 | 第75-77页 |
| 2.3.6.5 重组α-半乳糖苷酶AgaAHJ8的酶学性质研究 | 第77-83页 |
| 2.4 讨论 | 第83-85页 |
| 2.5 本章小结 | 第85-88页 |
| 第3章 重组α-半乳糖苷酶的转糖基作用与协同作用 | 第88-109页 |
| 3.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 3.1.1 菌株 | 第88页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第88页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第88-89页 |
| 3.1.4 常用溶液 | 第89页 |
| 3.1.5 常用培养基 | 第89页 |
| 3.2 实验方法 | 第89-93页 |
| 3.2.1 重组 α-半乳糖苷酶转糖基样品的制备 | 第89-90页 |
| 3.2.2 重组 α-半乳糖苷酶的转糖基作用 | 第90-92页 |
| 3.2.2.1 薄层层析法(TLC法) | 第90-91页 |
| 3.2.2.2 质谱法 | 第91-92页 |
| 3.2.3 重组 α-半乳糖苷酶水解和转糖基产物对益菌的促生长作用 | 第92页 |
| 3.2.4 AgaAHJ8与ManHJ14的协同作用 | 第92-93页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第93-104页 |
| 3.3.1 重组 α-半乳糖苷酶AgaAJB07转糖基作用 | 第93-96页 |
| 3.3.2 重组 α-半乳糖苷酶AgaAHJG4转糖基作用 | 第96-99页 |
| 3.3.3 重组 α-半乳糖苷酶AgaAHJ8转糖基作用 | 第99-101页 |
| 3.3.4 重组 α-半乳糖苷酶作用于蜜二糖的产物对益生菌的促生长作用 | 第101-103页 |
| 3.3.5 AgaAHJ8与ManHJ14的协同作用 | 第103-104页 |
| 3.4 讨论 | 第104-106页 |
| 3.5 本章小结 | 第106-109页 |
| 第4章 总结与展望 | 第109-114页 |
| 4.1 总结 | 第109-111页 |
| 4.2 创新 | 第111-112页 |
| 4.3 展望 | 第112-114页 |
| 附录 | 第114-139页 |
| 附录A 实验中所使用的缓冲液的配置 | 第114-117页 |
| A1 不同pH值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第114-115页 |
| A2 不同pH值的甘氨酸-NaOH缓冲液的配制 | 第115页 |
| A3 不同pH值的Tris-HCl缓冲液的配制 | 第115-116页 |
| A4 不同pH值的硼砂-NaOH缓冲液的配制 | 第116-117页 |
| 附录B 三个重组 α-半乳糖苷酶基因序列 | 第117-122页 |
| B1 AgaAJB07的核酸序列 | 第117-118页 |
| B2 AgaAHJG4的核酸序列 | 第118-120页 |
| B3 AgaAHJ8的核酸序列 | 第120-122页 |
| 附录C 三个重组 α-半乳糖苷酶的氨基酸序列 | 第122-124页 |
| C1 AgaAJB07的氨基酸序列 | 第122页 |
| C2 AgaAHJG4的氨基酸序列 | 第122-123页 |
| C3 Aga AHJ8 的氨基酸序列 | 第123-124页 |
| 附录D 重组α-半乳糖苷酶Aga AJB07 转糖基产物ESI-MS谱图 | 第124-131页 |
| 附录E 重组α-半乳糖苷酶Aga AHJG4 转糖基产物ESI-MS谱图 | 第131-136页 |
| 附录F 重组α-半乳糖苷酶Aga AHJ8 转糖基产物ESI-MS谱图 | 第136-138页 |
| 附录G 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-147页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
