| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 胃癌 | 第12-15页 |
| 1.2.1 胃癌的类型及分布 | 第12页 |
| 1.2.2 胃癌的分期 | 第12-13页 |
| 1.2.3 胃癌发生发展的分子机制 | 第13-14页 |
| 1.2.4 胃癌的治疗方法 | 第14-15页 |
| 1.3 PTPRU的研究背景 | 第15-17页 |
| 1.3.1 PTPs家族与癌症 | 第15-17页 |
| 1.3.2 PTPRU与癌症 | 第17页 |
| 1.4 Wnt/β-catenin通路 | 第17-19页 |
| 1.5 细胞运动及局部粘附蛋白 | 第19页 |
| 1.6 PI3K/Akt通路 | 第19-20页 |
| 1.7 Ras/Raf/MEK/ERK通路 | 第20-22页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 细胞培养 | 第22页 |
| 2.2 临床样本的收集 | 第22页 |
| 2.3 干扰质粒构建 | 第22-24页 |
| 2.3.1 引物合成 | 第22页 |
| 2.3.2 载体酶切 | 第22-23页 |
| 2.3.3 克隆构建 | 第23-24页 |
| 2.4 有效shRNA的筛选 | 第24页 |
| 2.5 干扰质粒的病毒包装 | 第24页 |
| 2.6 Real-time PCR | 第24-25页 |
| 2.7 蛋白质样品的制备 | 第25-26页 |
| 2.8 Western Blot | 第26-28页 |
| 2.8.1 聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第26-27页 |
| 2.8.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.8.3 转膜 | 第27页 |
| 2.8.4 封闭 | 第27页 |
| 2.8.5 孵育一抗 | 第27-28页 |
| 2.8.6 孵育二抗 | 第28页 |
| 2.8.7 胶片显影 | 第28页 |
| 2.9 细胞免疫荧光 | 第28-29页 |
| 2.10 MTT实验 | 第29页 |
| 2.11 克隆形成实验 | 第29页 |
| 2.12 流式细胞术 | 第29-30页 |
| 2.13 划痕实验 | 第30页 |
| 2.14 Transwell小室迁移实验 | 第30页 |
| 2.15 Transwell侵袭小室实验 | 第30-31页 |
| 2.16 细胞粘附实验 | 第31页 |
| 2.17 免疫沉淀实验 | 第31页 |
| 2.18 荧光素酶报告实验 | 第31-32页 |
| 2.19 数据统计 | 第32-33页 |
| 第3章 实验结果 | 第33-48页 |
| 3.1 PTPRU在胃癌细胞系中的表达 | 第33页 |
| 3.2 PTPRU在胃癌细胞系胞浆和胞核中的表达情况 | 第33-34页 |
| 3.3 PTPRU在胃癌组织和其邻近的正常组织的表达 | 第34-35页 |
| 3.4 shRNA敲减验证效果 | 第35-38页 |
| 3.4.1 qPCR验证干扰后PTPRU的mRNA水平下调 | 第35-36页 |
| 3.4.2 Western blot验证敲减后PTPRU的蛋白水平 | 第36-37页 |
| 3.4.3 细胞免疫荧光检测PTPRU的亚细胞定位和验证shPTPRU的敲减效果 | 第37-38页 |
| 3.5 敲减PTPRU抑制胃癌细胞的存活和增殖能力 | 第38-40页 |
| 3.5.1 MTT法验证敲减PTPRU抑制胃癌细胞系的增殖能力 | 第38-39页 |
| 3.5.2 克隆形成法证明敲减PTPRU抑制胃癌细胞的克隆形成 | 第39-40页 |
| 3.6 PTPRU的敲减影响胃癌细胞的细胞周期分布和相关蛋白的表达 | 第40-42页 |
| 3.6.1 敲减PTPRU导致胃癌细胞的G0/G1期阻滞 | 第40-41页 |
| 3.6.2 敲减PTPRU影响细胞增殖相关蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.7 敲减PTPRU抑制胃癌细胞的运动 | 第42-46页 |
| 3.7.1 敲减PTPRU抑制胃癌细胞迁移 | 第42-44页 |
| 3.7.2 敲减PTPRU抑制胃癌细胞侵袭 | 第44-45页 |
| 3.7.3 敲减PTPRU导致胃癌细胞粘附到基质上的能力降低 | 第45页 |
| 3.7.4 敲减PTPRU后影响细胞运动的相关蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.8 敲减PTPRU影响β-catenin的酪氨酸磷酸化和转录活性 | 第46-48页 |
| 第4章 讨论 | 第48-52页 |
| 第5章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录Ⅰ 在校期间发表的文章和专利 | 第64页 |
