| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 日本沼虾研究概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 日本沼虾形态特征及生活习性 | 第10页 |
| 1.1.2 日本沼虾养殖现状及面临的问题 | 第10-11页 |
| 1.2 螺原体的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.1 螺原体的分类地位及生物学特征 | 第11页 |
| 1.2.2 螺原体的寄主范围 | 第11-12页 |
| 1.3 先天性免疫的研究概述 | 第12-14页 |
| 1.3.1 对先天性免疫的初步认识 | 第12页 |
| 1.3.2 甲壳动物的先天性免疫系统 | 第12-14页 |
| 1.4 凝集素的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4.1 凝集素的简述 | 第14-15页 |
| 1.4.2 凝集素的发现历程 | 第15页 |
| 1.4.3 凝集素的功能研究 | 第15-16页 |
| 1.4.4 甲壳动物凝集素的基本概况 | 第16-17页 |
| 1.4.5 总结 | 第17页 |
| 1.5 糖基化蛋白的功能研究 | 第17-18页 |
| 1.6 本论文的主要研究目的、内容、意义以及技术路线 | 第18-20页 |
| 第2章 日本沼虾C型凝集素(MnCTLDcp1)的功能特性研究 | 第20-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验动物、细菌 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要的实验器材和设备 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 日本沼虾cDNA获取 | 第22页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第22-24页 |
| 2.2.3 序列分析和系统进化分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 凝集素细菌刺激的表达模式分析 | 第25页 |
| 2.2.5 重组质粒原核表达与纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组蛋白的糖结合 | 第26-27页 |
| 2.2.7 重组蛋白的细菌凝集和多糖竞争性抑制实验 | 第27-28页 |
| 2.2.8 重组蛋白的细菌结合和多糖竞争性抑制实验 | 第28-29页 |
| 2.2.9 MnCTLDcp1基因干扰 | 第29-31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-41页 |
| 2.3.1 MnCTLDcp1的基因克隆和序列分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2 多序列比对和系统进化树分析 | 第32-34页 |
| 2.3.3 MnCTLDcp1的时空表达模式 | 第34-36页 |
| 2.3.4 MnCTLDcp1的重组表达和纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.5 MnCTLDcp1重组蛋白的糖结合活性分析 | 第37-38页 |
| 2.3.6 MnCTLDcp1重组蛋白的凝集活性分析 | 第38-39页 |
| 2.3.7 MnCTLDcp1结合细菌的活性 | 第39-40页 |
| 2.3.8 MnCTLDcp1基因干扰后嗜水气单胞菌侵染的影响 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第3章 日本沼虾C型凝集素MnCTLDcp2、MnCTLDcp3的功能特性研究 | 第43-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 实验细菌 | 第43页 |
| 3.1.2 主要器材、设备 | 第43页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 3.2.1 日本沼虾cDNA获取 | 第44页 |
| 3.2.2 基因克隆 | 第44-45页 |
| 3.2.3 序列分析和系统进化分析 | 第45页 |
| 3.2.4 凝集素细菌刺激的表达模式 | 第45页 |
| 3.2.5 体外重组质粒原核表达及纯化 | 第45页 |
| 3.2.6 体外重组蛋白的细菌凝集 | 第45页 |
| 3.2.7 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3基因干扰 | 第45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-55页 |
| 3.3.1 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3的基因克隆和序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3.2 多序列比对和系统进化树分析 | 第47-50页 |
| 3.3.3 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3在mRNA水平上的表达模式 | 第50-52页 |
| 3.3.4 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3的重组表达和纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.5 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3重组蛋白的凝集活性分析 | 第53-54页 |
| 3.3.6 MnCTLDcp2和MnCTLDcp3基因干扰后嗜水气单胞菌侵染的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第4章 利用凝集素筛选螺原体糖基化蛋白及功能研究 | 第57-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 实验细菌 | 第57页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第57页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.2.1 凝集素与螺原体的结合活性实验 | 第58-59页 |
| 4.2.2 螺原体刺激的表达模式 | 第59页 |
| 4.2.3 Far-Western筛选凝集素与螺原体互作蛋白 | 第59-60页 |
| 4.2.4 筛选的糖基化蛋白基因克隆、体外表达纯化 | 第60页 |
| 4.2.5 Far-Western验证凝集素与螺原体糖基化蛋白的相互作用 | 第60-61页 |
| 4.2.6 免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第61页 |
| 4.2.7 糖基化蛋白多克隆抗体制备 | 第61-62页 |
| 4.2.8 S2细胞毒性实验(MTT实验) | 第62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-71页 |
| 4.3.1 螺原体刺激的表达模式 | 第62-64页 |
| 4.3.2 螺原体与MnCTLDcp1的结合作用 | 第64页 |
| 4.3.3 Far-Western筛选螺原体糖基化蛋白 | 第64-65页 |
| 4.3.4 螺原体糖基化蛋白质谱分析结果 | 第65页 |
| 4.3.5 三种螺原体糖基化蛋白的体外表达及纯化 | 第65-66页 |
| 4.3.6 Far-Western体外验证凝集素与糖基化蛋白的相互作用 | 第66-67页 |
| 4.3.7 免疫共沉淀验证凝集素与糖基化蛋白的相互作用 | 第67页 |
| 4.3.8 多克隆抗体效果验证 | 第67-68页 |
| 4.3.9 螺原体糖基化膜蛋白的验证实验 | 第68-69页 |
| 4.3.10 螺原体糖基化蛋白的细胞毒性实验 | 第69-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第5章 结论 | 第73-75页 |
| 5.1 三种C型凝集素的特性功能研究 | 第73页 |
| 5.2 利用C型凝集素筛选螺原体的糖基化蛋白以及基因克隆、蛋白表达纯化 | 第73页 |
| 5.3 螺原体糖基化蛋白的功能研究 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第84-85页 |
| 获奖 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
