| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一部分 一个显性多囊肾病家系的致病突变分析 | 第16-44页 |
| 第一章 前言 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1 研究对象 | 第18页 |
| 2.2 全体家系成员的外周血样本 | 第18页 |
| 2.3 先证者的肾组织样本和正常的肾组织样本 | 第18页 |
| 2.4 主要的试剂 | 第18-21页 |
| 2.4.1 基因组DNA与组织RNA提取试剂 | 第18-19页 |
| 2.4.2 PCR试剂和核酸电泳试剂 | 第19-20页 |
| 2.4.3 总蛋白提取试剂 | 第20页 |
| 2.4.4 逆转录和荧光定量PCR试剂 | 第20页 |
| 2.4.5 免疫组化和免疫荧光试剂 | 第20-21页 |
| 2.5 主要的仪器设备 | 第21-22页 |
| 第三章 实验方法 | 第22-33页 |
| 3.1 临床症状检查和家系图 | 第22页 |
| 3.2 家系样本的采集 | 第22页 |
| 3.3 外周血基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.4 肾组织总RNA和总蛋白的提取 | 第23-24页 |
| 3.4.1 肾组织总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.4.2 肾组织蛋白的提取 | 第24页 |
| 3.5 基因组DNA、RNA和蛋白浓度测定 | 第24-25页 |
| 3.5.1 DNA浓度的测定 | 第24页 |
| 3.5.2 RNA浓度的测定 | 第24页 |
| 3.5.3 蛋白浓度的测定(BCA法) | 第24-25页 |
| 3.6 全基因组二代测序和直接测序 | 第25页 |
| 3.7 相关基因MRNA定量分析 | 第25-27页 |
| 3.7.1 总RNA逆转录 | 第25-26页 |
| 3.7.2 荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 3.8 免疫组织化学、免疫荧光和TUNEL | 第27-29页 |
| 3.8.1 石蜡包埋切片 | 第27页 |
| 3.8.2 免疫组织化学 | 第27-28页 |
| 3.8.3 免疫荧光 | 第28页 |
| 3.8.4 TUNEL | 第28-29页 |
| 3.9 SDS-PAGE电泳和WESTERN BLOT | 第29-32页 |
| 3.9.1 SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| 3.9.2 WESTERN BLOT | 第30-32页 |
| 3.10 突变致病性预测 | 第32页 |
| 3.11 数据库 | 第32-33页 |
| 第四章 实验结果 | 第33-42页 |
| 4.1 家系图及家系成员的临床特征 | 第33-36页 |
| 4.2 突变检测 | 第36-37页 |
| 4.3 组织PC1表达分析 | 第37-38页 |
| 4.4 增殖和凋亡分析 | 第38-39页 |
| 4.5 基质重构相关基因的表达分析 | 第39-40页 |
| 4.6 突变的致病性评估 | 第40-42页 |
| 第五章 分析与讨论 | 第42-44页 |
| 第二部分 一个脊髓小脑性共济失调家系的致病基因突变鉴定 | 第44-67页 |
| 第一章 前言 | 第44-45页 |
| 第二章 实验材料 | 第45-48页 |
| 2.1 研究对象 | 第45页 |
| 2.2 全体家系成员外周血样本 | 第45页 |
| 2.3 主要的试剂和耗材 | 第45-46页 |
| 2.3.1 基因组DNA提取试剂 | 第45页 |
| 2.3.2 常规PCR和电泳试剂 | 第45-46页 |
| 2.3.3 毛细管电泳试剂 | 第46页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第46-48页 |
| 第三章 实验方法 | 第48-54页 |
| 3.1 临床症状检查和家系图 | 第48页 |
| 3.2 家系外周血样本采集 | 第48页 |
| 3.3 样本基因组DNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.4 诊断技术流程 | 第49页 |
| 3.5 候选基因筛查 | 第49-51页 |
| 3.6 引物设计 | 第51-52页 |
| 3.7 PCR扩增体系 | 第52页 |
| 3.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第52-53页 |
| 3.9 毛细管电泳 | 第53-54页 |
| 第四章 实验结果 | 第54-66页 |
| 4.1 家系中已知的病患情况 | 第54页 |
| 4.2 先证者的临床特征 | 第54-55页 |
| 4.3 突变检测结果 | 第55-66页 |
| 第五章 分析与讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 攻读学位期间成果 | 第70-71页 |
| 英文缩略词表 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |