| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 FGF5的作用及其研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2 现代人工核酸酶基因编辑技术的发展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 锌指酶技术 | 第10页 |
| 1.2.2 转录激活因子样效应物核酸酶技术 | 第10-11页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9技术 | 第11-12页 |
| 1.3 现代人工核酸酶基因编辑技术的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.1 现代人工核酸酶基因编辑技术在基础医学研究领域的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 现代人工核酸酶基因编辑技术在农业生产中的应用 | 第13页 |
| 1.4 动物转基因技术的安全性 | 第13-14页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 2 编辑绒山羊FGF5基因TALEN载体的构建及活性检测 | 第15-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验设备 | 第15页 |
| 2.1.2 试剂及耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.3 载体及菌种 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-25页 |
| 2.2.1 编辑绒山羊FGF5基因无标记TALEN载体的构建 | 第16-19页 |
| 2.2.2 SSA活性检测法检测TALEN质粒活性 | 第19-23页 |
| 2.2.3 T7核酸内切酶Ⅰ法检测TALEN质粒活性 | 第23-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 编辑绒山羊FGF5基因无标记TALEN载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 SSA活性检测法检测TALEN质粒活性 | 第26-28页 |
| 2.3.3 T7核酸内切酶Ⅰ法检测TALEN质粒活性 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 3 应用TALEN技术编辑FGF5基因细胞系的建立 | 第30-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第30页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第30页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 质粒大量提取 | 第31-32页 |
| 3.2.2 山羊胎儿皮肤成纤维细胞的复苏 | 第32页 |
| 3.2.3 山羊胎儿皮肤成纤维细胞的传代 | 第32页 |
| 3.2.4 细胞电转染 | 第32-33页 |
| 3.2.5 单细胞法筛选无标记细胞及扩大培养 | 第33页 |
| 3.2.6 山羊胎儿皮肤成纤维细胞的冻存 | 第33页 |
| 3.2.7 细胞的基因组DNA提取及测序鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-35页 |
| 3.3.1 细胞电转染 | 第34页 |
| 3.3.2 单细胞法筛选无标记细胞及扩大培养 | 第34-35页 |
| 3.3.3 转基因细胞系的鉴定 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 4 结论 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 附录 | 第42-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
