| 本研究的创新点 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-32页 |
| 1. 酿酒酵母细胞出芽过程中的极性生长 | 第14-20页 |
| 1.1 酿酒酵母G1期的极性建立 | 第16-17页 |
| 1.2 顶端生长-各向同性生长的转换 | 第17-18页 |
| 1.3 芽体-母细胞不对称性生长的终止 | 第18-19页 |
| 1.4 胞质分裂与细胞分离 | 第19-20页 |
| 2. Septin在细胞极性生长中的功能 | 第20-25页 |
| 2.1 酿酒酵母septin结构的成分与组装 | 第20-22页 |
| 2.2 Septin结构在细胞周期中的变化 | 第22-23页 |
| 2.3 Septin细胞学功能的模型 | 第23-24页 |
| 2.3.1 Septin的“蛋白支架”功能 | 第23-24页 |
| 2.3.2 Septin的“扩散屏障”功能 | 第24页 |
| 2.4 Septin与芽体的形态发生 | 第24-25页 |
| 3. 细胞极性生长过程中的囊泡运输 | 第25-30页 |
| 3.1 囊泡运输过程及相关功能蛋白 | 第26-27页 |
| 3.2 Rho GTP酶对囊泡运输的调控作用 | 第27-29页 |
| 3.3 Kin1与Kin2在囊泡运输过程中的功能 | 第29-30页 |
| 4. 本课题的研究目的、内容和意义 | 第30-32页 |
| 4.1 研究目的 | 第31页 |
| 4.2 研究内容 | 第31页 |
| 4.3 研究意义 | 第31-32页 |
| 第二章 酿酒酵母Kin2的胞内定位及功能研究 | 第32-77页 |
| 1. 实验材料 | 第32-41页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第32-35页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第35-36页 |
| 1.3 培养基及实验试剂的配制 | 第36-41页 |
| 2. 实验方法 | 第41-54页 |
| 2.1 质粒构建 | 第41-42页 |
| 2.2 酿酒酵母细胞的培养及形态观察 | 第42-43页 |
| 2.3 酿酒酵母的生长缺陷表型观察 | 第43-44页 |
| 2.4 酿酒酵母细胞LiAc/ssDNA/PEG化学转化 | 第44页 |
| 2.5 酿酒酵母细胞基因组提取 | 第44-45页 |
| 2.6 酿酒酵母细胞壁几丁质的染色 | 第45-46页 |
| 2.7 酵母双杂交文库筛选 | 第46-48页 |
| 2.8 酵母双杂交检测 | 第48页 |
| 2.9 双分子荧光互补检测实验 | 第48-49页 |
| 2.10 酿酒酵母细胞基因敲除 | 第49-51页 |
| 2.11 酿酒酵母单倍体杂交分孢子 | 第51-52页 |
| 2.12 酿酒酵母细胞总蛋白提取 | 第52-53页 |
| 2.13 Western Blot蛋白检测 | 第53-54页 |
| 3. 实验结果 | 第54-73页 |
| 3.1 Kin2的胞内定位研究 | 第54-60页 |
| 3.1.1 Kin2在细胞膜上具有极性定位 | 第54-56页 |
| 3.1.2 Kin2定位结构域的鉴定 | 第56-59页 |
| 3.1.3 Kin2-TD1的功能为Kin2参与囊泡运输调控的能力所必需 | 第59-60页 |
| 3.2 Kin2在细胞中的过量表达效应研究 | 第60-66页 |
| 3.2.1 KIN1与KIN2基因缺失对细胞形态或生长无显著影响 | 第61-62页 |
| 3.2.2 过量表达Kin2影响septin的组织与细胞壁 | 第62-66页 |
| 3.3 Kin2调控细胞septin组织的机制 | 第66-73页 |
| 3.3.1 Kin2的两个定位结构域在其影响septin组织过程中的作用 | 第66-70页 |
| 3.3.2 Kin2的C端区段通过与septin和极性小体相互作用影响septin组织 | 第70-73页 |
| 4. 讨论 | 第73-75页 |
| 4.1 Kin2的胞内定位及其定位机制 | 第73-74页 |
| 4.2 Kin2对酿酒酵母细胞中septin组装和细胞壁合成的影响 | 第74-75页 |
| 5. 小结 | 第75-77页 |
| 第三章 Kin2调控分子的分离鉴定 | 第77-92页 |
| 1. 实验材料 | 第77-80页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第77-79页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第79页 |
| 1.3 培养基及实验试剂的配制 | 第79-80页 |
| 2. 实验方法 | 第80-83页 |
| 2.1 质粒构建 | 第80-81页 |
| 2.2 酵母双杂交文库筛选 | 第81页 |
| 2.3 酵母双杂交检测 | 第81页 |
| 2.4 双分子荧光互补检测实验 | 第81页 |
| 2.5 GST pull-down检测实验 | 第81-83页 |
| 3. 实验结果 | 第83-90页 |
| 3.1 Kin2通过其C端在细胞表面极性生长位点与Rho3相互作用 | 第83-85页 |
| 3.2 Rho3是Kin2的潜在上游激活因子 | 第85-88页 |
| 3.2.1 激活型Rho3能够提高Kin2干扰septin组织的能力 | 第85-86页 |
| 3.2.2 Rho3对Kin2调控囊泡运输过程没有显著促进作用 | 第86-88页 |
| 3.3 Bmh1是Kin2的潜在调控分子 | 第88-90页 |
| 4. 讨论 | 第90-91页 |
| 5. 小结 | 第91-92页 |
| 研究总结及展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-99页 |
| 在读期间已发表论文 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
