| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-21页 |
| 参考文献 | 第19-21页 |
| 第二章 实验研究 | 第21-58页 |
| 第一部分 小鼠软骨前体细胞的分离、纯化和鉴定 | 第21-27页 |
| 1 实验目的 | 第21页 |
| 2 实验动物 | 第21页 |
| 3 实验材料 | 第21-23页 |
| 4 实验方法 | 第23-25页 |
| 4.1 小鼠软骨细胞和软骨前体细胞的分离和培养 | 第23页 |
| 4.2 细胞冻存 | 第23页 |
| 4.3 细胞复苏 | 第23-24页 |
| 4.4 细胞免疫荧光 | 第24页 |
| 4.5 流式细胞检测 | 第24页 |
| 4.6 统计分析 | 第24-25页 |
| 5 结果 | 第25-27页 |
| 5.1 软骨细胞形态 | 第25页 |
| 5.2 免疫荧光鉴定 | 第25页 |
| 5.3 流式细胞仪鉴定 | 第25-27页 |
| 第二部分 威灵仙对软骨细胞及软骨前体细胞增殖的影响及其最适浓度 | 第27-30页 |
| 1 实验目的 | 第27页 |
| 2 实验材料 | 第27页 |
| 3 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.1 实验设计 | 第27-28页 |
| 3.2 CCK-8法检测细胞增殖 | 第28页 |
| 3.3 数据统计分析 | 第28页 |
| 4 结果 | 第28-30页 |
| 4.1 不同浓度威灵仙对CPCs增殖的影响 | 第28页 |
| 4.2 不同浓度威灵仙对CCs增殖的影响 | 第28-30页 |
| 第三部分 纤连蛋白对软骨细胞及软骨前体细胞增殖的影响及其最适浓度 | 第30-32页 |
| 1 实验目的 | 第30页 |
| 2 实验材料 | 第30页 |
| 3 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.1 实验设计 | 第30页 |
| 3.2 数据统计分析 | 第30-31页 |
| 4 结果 | 第31-32页 |
| 4.1 不同浓度FN对CPCs增殖的影响 | 第31页 |
| 4.2 不同浓度FN对CCs增殖的影响 | 第31-32页 |
| 第四部分 整合素α5β1信号通路介导纤连蛋白促进软骨前体细胞增殖 | 第32-38页 |
| 1 实验目的 | 第32页 |
| 2 实验材料 | 第32-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.1 实验设计 | 第33页 |
| 3.2 EdU染色实验方法 | 第33-34页 |
| 3.3 考马斯亮兰法测定蛋白(Bradford法) | 第34页 |
| 3.4 Westen blotting步骤 | 第34-36页 |
| 3.5 数据统计分析 | 第36页 |
| 4 结果 | 第36-38页 |
| 4.1 EdU实验检测细胞增殖 | 第36页 |
| 4.2 CCK-8实验检测细胞增殖 | 第36-37页 |
| 4.3 Cyclin D1细胞标志物免疫印迹检测细胞增殖 | 第37-38页 |
| 第五部分 整合素α5β1信号通路介导纤连蛋白促进软骨前体细胞迁移 | 第38-42页 |
| 1 实验目的 | 第38页 |
| 2 实验材料 | 第38页 |
| 3 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.1 实验设计 | 第38-39页 |
| 3.2 transwell细胞迁移实验 | 第39页 |
| 3.3 细胞划痕的实验 | 第39-40页 |
| 3.4 数据统计分析 | 第40页 |
| 4 结果 | 第40-42页 |
| 4.1 细胞迁移实验结果 | 第40页 |
| 4.2 细胞划痕实验结果 | 第40-42页 |
| 第六部分 整合素α5β1信号通路介导纤连蛋白促进软骨前体细胞分化 | 第42-47页 |
| 1 实验目的 | 第42页 |
| 2 实验材料 | 第42页 |
| 3 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.1 实验设计 | 第42-43页 |
| 3.2 细胞总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.3 RT-PCR | 第43-44页 |
| 3.4 数据统计分析 | 第44-45页 |
| 4 结果 | 第45-47页 |
| 4.1 免疫染色检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达 | 第45页 |
| 4.2 荧光定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达 | 第45-47页 |
| 第七部分 纤连蛋白对骨性关节炎早期修复的影响 | 第47-55页 |
| 1 实验目的 | 第47页 |
| 2 实验材料 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.1 实验设计 | 第47-48页 |
| 3.2 小鼠模型建立 | 第48页 |
| 3.3 FN/Pluronic凝胶溶液制备 | 第48-49页 |
| 3.4 HE的染色: | 第49页 |
| 3.5 番红O染色 | 第49页 |
| 3.6 Ⅱ型胶原免疫组化染色 | 第49-50页 |
| 3.7 Westen blotting步骤 | 第50页 |
| 3.8 国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research SocietyInternational,OARSI)评分 | 第50-51页 |
| 3.9 数据统计分析 | 第51页 |
| 4 结果 | 第51-55页 |
| 4.1 病理染色结果 | 第51页 |
| 4.2 免疫组化染色检测二型胶原 | 第51-52页 |
| 4.3 软骨组织学评分 | 第52页 |
| 4.4 免疫印迹检测X型胶原和PCNA蛋白表达 | 第52页 |
| 4.5 生物力学检测软骨强度 | 第52-55页 |
| 第八部分 软骨修复过程中软骨前体细胞的动态分布 | 第55-58页 |
| 1 实验目的 | 第55页 |
| 2 实验材料 | 第55页 |
| 3 实验方法 | 第55页 |
| 3.1 实验设计 | 第55页 |
| 3.2 数据统计分析 | 第55页 |
| 4 结果 | 第55-58页 |
| 4.1 免疫荧光定位 | 第55-56页 |
| 4.2 免疫荧光定量分析 | 第56页 |
| 4.3 流式细胞仪检测 | 第56页 |
| 4.4 免疫印迹检测整合素α5β1表达 | 第56页 |
| 4.5 免疫荧光检测FN表达 | 第56-58页 |
| 第三章 讨论 | 第58-75页 |
| 1 OA的发病机制研究 | 第58-59页 |
| 1.1 关节表面胶原破坏 | 第58-59页 |
| 1.2 软骨细胞凋亡 | 第59页 |
| 2 组织工程早期软骨修复 | 第59-66页 |
| 2.1 种子细胞 | 第59-61页 |
| 2.2 载体材料 | 第61-62页 |
| 2.3 细胞因子 | 第62-65页 |
| 2.4 中医药应用于软骨组织工程 | 第65-66页 |
| 3 FN促进由α5 β 1整合素信号通路介导的软骨再生 | 第66-68页 |
| 3.1 FN与CPC增殖、迁移、分化 | 第66-67页 |
| 3.2 FN通过整合素α5β1信号通路激活CPCs | 第67-68页 |
| 4 软骨再生与功能的体内外评价系统 | 第68-71页 |
| 4.1 CPCs表面标志物 | 第68-70页 |
| 4.2 软骨修复的评价 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第四章 总结与展望 | 第75-77页 |
| 1 主要研究结果 | 第75页 |
| 2 特色与创新 | 第75-76页 |
| 3 论文的不足与进一步研究的方向 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-111页 |
| 附录1: 文献综述 | 第77-86页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 附录2: 本研究相关成果发表论文 | 第86-111页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
