| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 被子植物雄配子体的结构、功能和发育 | 第13-17页 |
| 1.1.1 雄配子体的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 雄配子体的发育过程 | 第14页 |
| 1.1.3 花粉与柱头的相互作用 | 第14-17页 |
| 1.1.3.1 花粉的黏附、水合和萌发 | 第15-16页 |
| 1.1.3.2 花粉管侵入柱头生长 | 第16-17页 |
| 1.1.3.3 花粉管的生长 | 第17页 |
| 1.2 花粉管生长中的基因表达调控 | 第17-19页 |
| 1.2.1 小G蛋白信号分子 | 第18页 |
| 1.2.2 ROS信号分子 | 第18页 |
| 1.2.3 磷酸肌醇信号分子 | 第18-19页 |
| 1.2.4 Ca~(2+)信号 | 第19页 |
| 1.3 内吞作用途径和循环在花粉管生长过程中的作用 | 第19-21页 |
| 1.3.1 内吞作用与物质循环 | 第19-20页 |
| 1.3.2 外排作用 | 第20-21页 |
| 1.4 依赖于网格蛋白的内吞作用 | 第21-25页 |
| 1.4.1 网格蛋白有被小泡 | 第21-22页 |
| 1.4.2 拟南芥中参与网格蛋白小泡运输的衔接蛋白 | 第22页 |
| 1.4.3 不同衔接蛋白的功能与定位 | 第22-25页 |
| 1.4.3.1 拟南芥中5类AP复合体的功能与定位 | 第23-24页 |
| 1.4.3.2 单体AP的功能与定位 | 第24-25页 |
| 1.5 不同抑制剂对囊泡运输的作用与影响 | 第25-26页 |
| 1.6 本实验的目的与意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 植物材料及生长条件 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.3.1 各种酶 | 第27-28页 |
| 2.1.3.2 各种生化试剂 | 第28页 |
| 2.1.3.3 各种缓冲液及培养基配方 | 第28-30页 |
| 2.1.4 实验中所有引物名称及其序列 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 构建植物转基因表达载体的一般步骤 | 第31-34页 |
| 2.2.1.1 PCR引物设计 | 第31页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增目的片段 | 第31-32页 |
| 2.2.1.3 目的片段与克隆载体的连接 | 第32页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.1.5 大肠杆菌感受态细胞的转化(热激法) | 第33页 |
| 2.2.1.6 大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.2.1.7 质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.1.8 质粒DNA的酶切验证 | 第34页 |
| 2.2.1.9 DNA片段的回收(试剂盒法) | 第34页 |
| 2.2.1.10 目的DNA片段与质粒DNA片段的连接 | 第34页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| 2.2.2.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2.2 电转法转化农杆菌 | 第35页 |
| 2.2.3 拟南芥的栽培与转化 | 第35-36页 |
| 2.2.3.1 拟南芥的栽培 | 第35页 |
| 2.2.3.2 拟南芥的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.4 植物总DNA的提取 | 第36页 |
| 2.2.5 植物总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.6 反转录cDNA第一链的合成 | 第37页 |
| 2.2.7 Real-time PCR分析 | 第37页 |
| 2.2.8 DG1的组织定位 | 第37-38页 |
| 2.2.9 GUS染色 | 第38页 |
| 2.2.10 花粉的DAPI染色分析 | 第38页 |
| 2.2.11 花药的亚历山大染色 | 第38页 |
| 2.2.12 苯胺蓝染色 | 第38页 |
| 2.2.13 花粉萌发实验 | 第38-39页 |
| 2.2.14 限量授粉实验 | 第39页 |
| 2.2.15 Tyr A23抑制剂处理花粉管实验 | 第39页 |
| 2.2.16 其它抑制剂处理花粉管实验 | 第39页 |
| 2.2.17 ImageJ测量荧光图片灰度分析 | 第39-40页 |
| 2.2.18 Aritificial miRNA载体的构建与植株的获得 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| 3.1 拟南芥衔接蛋白DG1的遗传与表型分析 | 第42-48页 |
| 3.1.1 dg1突变体的分离 | 第42页 |
| 3.1.2 dg1/+杂合突变体的自交后代分离比异常且没有纯合体 | 第42-43页 |
| 3.1.3 dg1-2/+角果中的种子数与野生型类似 | 第43页 |
| 3.1.4 dg1-2突变体通过雄配子的传递效率下降 | 第43-44页 |
| 3.1.5 dg1-2/+的花粉活性与野生型没有差别 | 第44页 |
| 3.1.6 部分dg1-2/+的花粉不能参与受精 | 第44页 |
| 3.1.7 dg1-2/+花粉的萌发率、萌发速率低于野生型 | 第44-45页 |
| 3.1.8 dg1-2中DG1与BGD的表达水平分析 | 第45-46页 |
| 3.1.9 Lat52：：amiDG1植株的表型分析 | 第46-47页 |
| 3.1.10 Lat52：：amiDG1花粉的活力、形态以及细胞核与野生型无明显差别 | 第47-48页 |
| 3.1.11 Lat52：：amiDG1植株的鉴定 | 第48页 |
| 3.2 DG1的序列分析 | 第48-50页 |
| 3.2.1 拟南芥DG1蛋白序列分析 | 第48-49页 |
| 3.2.2 μHD超家族的相关研究 | 第49-50页 |
| 3.3 DG1的表达模式分析 | 第50-56页 |
| 3.3.1 DG1在拟南芥发育过程中的表达模式 | 第50-51页 |
| 3.3.2 花粉萌发过程中DG1的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 花粉管在柱头中生长的过程中DG1的表达 | 第52-53页 |
| 3.3.4 花粉管中DG1的亚细胞定位 | 第53页 |
| 3.3.5 DG1在内吞过程中所起功能的验证 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
