致谢 | 第4-5页 |
中文摘要 | 第5-9页 |
ABSTRACT | 第9-13页 |
缩略词表 | 第14-18页 |
1 前言 | 第18-21页 |
2 实验材料与仪器 | 第21-24页 |
2.1 细胞株 | 第21页 |
2.2 动物 | 第21页 |
2.3 仪器 | 第21页 |
2.4 药物和主要试剂 | 第21-24页 |
2.4.1 药物 | 第21-22页 |
2.4.2 质粒 | 第22页 |
2.4.3 主要试剂 | 第22页 |
2.4.4 Western Blot实验中部分试剂的配制 | 第22-24页 |
3 实验方法 | 第24-31页 |
3.1 细胞培养 | 第24页 |
3.2 高转移卵巢癌细胞株的构建 | 第24页 |
3.3 划痕损伤修复实验检测细胞运动能力 | 第24页 |
3.4 Transwell小室实验检测细胞迁移能力 | 第24-25页 |
3.5 鸡胚尿囊膜实验模型检测细胞血管内扩散能力 | 第25页 |
3.6 siRNA基因沉默 | 第25页 |
3.7 质粒转染 | 第25-26页 |
3.8 免疫荧光实验 | 第26页 |
3.9 免疫组化实验 | 第26-27页 |
3.10 Western blot检测相关蛋白表达 | 第27-28页 |
3.10.1 提取总蛋白 | 第27页 |
3.10.2 Western blot | 第27-28页 |
3.11 Real-Time PCR检测相关基因表达 | 第28-29页 |
3.11.1 总mRNA提取(Trizol一步法) | 第28页 |
3.11.2 逆转录为cDNA | 第28页 |
3.11.3 PCR(聚合酶链反应) | 第28-29页 |
3.12 Elisa试剂盒检测相关蛋白分泌 | 第29页 |
3.13 SRB法测定细胞生存率 | 第29-30页 |
3.14 体内实验检测不同细胞的荷瘤小鼠模型对药物敏感性 | 第30页 |
3.15 数据分析 | 第30-31页 |
4 实验结果 | 第31-60页 |
4.1 SKOV3/T4细胞株的构建 | 第31-34页 |
4.1.1 SKOV3/T4细胞株的构建 | 第31页 |
4.1.2 SKOV3/T4细胞株运动能力的检测 | 第31-34页 |
4.2 SKOV3/T4细胞中EMT相关特征蛋白的检测 | 第34-37页 |
4.2.1 SKOV3/T4细胞形态变化 | 第34页 |
4.2.2 SKOV3/T4细胞中EMT相关特征蛋白的检测 | 第34-36页 |
4.2.3 SKOV3/T4细胞中EMT相关重要转录因子的检测 | 第36-37页 |
4.3 转录因子Slug在SKOV3/T4细胞高转移性状维持中的作用 | 第37-39页 |
4.3.1 SKOV3亲本细胞中Slug过表达对EMT相关特征蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
4.3.2 SKOV3亲本细胞中Slug过表达对细胞运动能力的影响 | 第38-39页 |
4.4 转录因子Slug与c-Met蛋白磷酸化之间相关性研究 | 第39-44页 |
4.4.1 SKOV3/T4细胞中酪氨酸激酶EGFR、VEGFR和c-Met的激活情况 | 第39-40页 |
4.4.2 转录因子Slug与c-Met蛋白磷酸化存在相关性 | 第40-42页 |
4.4.3 卵巢癌临床样本中转录因子Slug与c-Met磷酸化水平的相关性 | 第42-44页 |
4.5 SKOV3/T4细胞中c-Met信号通路以HGF配体非依赖的方式激活 | 第44-46页 |
4.5.1 SKOV3/T4细胞中c-Met与HGF mRNA表达水平的检测 | 第44-45页 |
4.5.2 SKOV3/T4细胞中HGF蛋白表达水平的检测 | 第45页 |
4.5.3 SKOV3/T4细胞中HGF蛋白分泌水平的检测 | 第45-46页 |
4.6 Slug通过Fibronectin调控c-Met蛋白磷酸化 | 第46-50页 |
4.6.1 IntegrinaV参与SKOV3/T4细胞c-Met蛋白磷酸化 | 第46-48页 |
4.6.2 Slug通过Fibronectin调控c-Met蛋白磷酸化 | 第48-50页 |
4.7 c-Met抑制剂对Slug过表达细胞运动能力的影响 | 第50-52页 |
4.8 转录因子Slug对细胞药物敏感性的影响 | 第52-54页 |
4.8.1 SKOV3/T4细胞药物敏感性的检测 | 第52-53页 |
4.8.2 转录因子Slug对细胞药物敏感性的影响 | 第53-54页 |
4.9 Slug和c-Met调控通路对SKOV3/T4细胞药物敏感性的影响 | 第54-60页 |
4.9.1 SKOV3/T4及Slug过表达细胞对c-Met抑制剂敏感性检测 | 第54-56页 |
4.9.2 不同细胞株中Slug的表达水平与对c-Met抑制剂敏感性的相关性 | 第56-57页 |
4.9.3 干扰Slug和c-Met调控通路对SKOV3/T4细胞药物敏感性的影响 | 第57-58页 |
4.9.4 SKOV3/T4细胞对ADR及XL184药物敏感性差异的体内验证 | 第58-60页 |
5 讨论 | 第60-65页 |
参考文献 | 第65-72页 |
综述 | 第72-89页 |
参考文献 | 第81-89页 |
硕士期间论文及会议摘要 | 第89-90页 |
参与科研项目 | 第90页 |
作者简介 | 第90页 |