| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 草甘膦的性质及其作用机理 | 第15-17页 |
| 1.1.1 草甘膦除草剂 | 第15-16页 |
| 1.1.2 草甘膦的理化性质和作用机理 | 第16-17页 |
| 1.2 EPSPS的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 EPSPS的发现 | 第17-18页 |
| 1.2.2 EPSPS的分类和定位 | 第18页 |
| 1.2.3 EPSPS的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 玉米转基因方法研究 | 第19-21页 |
| 1.3.1 农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| 1.3.2 基因枪法 | 第20页 |
| 1.3.3 花粉管通道法 | 第20页 |
| 1.3.4 超声波辅助花粉介导法和超声波辅助农杆菌介导萌发种子转化法 | 第20-21页 |
| 1.4 抗草甘膦转基因作物的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4.1 抗除草剂基因来源 | 第21页 |
| 1.4.2 抗除草剂作物抗性机理 | 第21-22页 |
| 1.5 抗草甘膦转EPSPS基因玉米的研究 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究的目的、意义和技术路线 | 第23-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和质粒载体 | 第25页 |
| 2.1.3 主要工具酶及试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26页 |
| 2.2 实验所需培养基及试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.2.1 大肠杆菌及农杆菌的培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞制备液 | 第27页 |
| 2.2.3 质粒DNA提取液 | 第27页 |
| 2.2.4 玉米基因组DNA提取液 | 第27页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳液 | 第27页 |
| 2.2.6 Southern blot | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.3.2 质粒对大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| 2.3.3 菌种的保存 | 第28页 |
| 2.3.4 质粒DNA的提取方法 | 第28-29页 |
| 2.3.5 质粒DNA浓度及纯度测量 | 第29页 |
| 2.3.6 酶切反应 | 第29页 |
| 2.3.7 CTAB法提取玉米基因组DNA | 第29-30页 |
| 2.3.8 PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.3.9 玉米总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| 2.3.10 Southern blot | 第31-35页 |
| 2.3.11 ELISA分析检测 | 第35页 |
| 2.3.12 蛋白含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.4 玉米转基因方法 | 第36-38页 |
| 2.4.1 超声波辅助花粉介导转化法 | 第36-37页 |
| 2.4.2 超声波辅助农杆菌介导萌发种子转化法 | 第37-38页 |
| 2.5 田间除草剂筛选鉴定标准 | 第38-39页 |
| 2.5.1 除草剂筛选浓度的确定 | 第38页 |
| 2.5.2 T_1代抗草甘膦转基因玉米筛选鉴定 | 第38页 |
| 2.5.3 T_2代抗草甘膦转基因玉米筛选鉴定 | 第38-39页 |
| 2.6 转基因玉米的分子检测 | 第39-41页 |
| 2.6.1 PCR检测CP4目的基因 | 第39页 |
| 2.6.2 RT-PCR检测目的基因的转录 | 第39-40页 |
| 2.6.3 Southern blot鉴定目的基因的拷贝数 | 第40页 |
| 2.6.4 ELISA分析蛋白表达情况 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-52页 |
| 3.1 质粒载体的鉴定 | 第41页 |
| 3.2 遗传转化结果 | 第41-42页 |
| 3.3 田间抗草甘膦转基因玉米的筛选鉴定 | 第42-46页 |
| 3.3.1 草甘膦筛选浓度确定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 T_1代田间抗草甘膦性状筛选鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 T_2代田间抗草甘膦性状筛选鉴定分析 | 第44-46页 |
| 3.4 转基因植株的PCR检测及Southern杂交 | 第46-49页 |
| 3.4.1 T_1代转基因植株的PCR检测及Southern杂交 | 第46-48页 |
| 3.4.2 T_2代转基因植株的PCR检测及Southern杂交 | 第48-49页 |
| 3.5 转基因植株的RNA提取及RT-PCR检测 | 第49页 |
| 3.6 转基因植株的ELISA检测 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 4.1 本论文所用转基因方法 | 第52-53页 |
| 4.2 抗草甘膦转基因玉米的表达分析 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-66页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 个人简况及联系方式 | 第69-71页 |
