导师简介 | 第1页 |
课题小组主要成员 | 第5-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
主要符号表 | 第12-13页 |
第一章 前言 | 第13-20页 |
1 肽酰基精氨酸脱亚胺酶Ⅳ(PAD4) | 第13-16页 |
2 GST pull-down | 第16-18页 |
3 融合蛋白可溶性表达 | 第18-20页 |
第二章 TNF-α诱导的 PAD4 蛋白在 HL-60 细胞中核转移现象观察 | 第20-26页 |
1 材料 | 第20-21页 |
·试剂 | 第20页 |
·仪器 | 第20-21页 |
2 研究方法 | 第21-24页 |
·HL-60 细胞复苏与培养 | 第21页 |
·TNF-α处理 HL-60 细胞 | 第21页 |
·Western Blot 分析 | 第21-24页 |
3 实验结果 | 第24页 |
4 讨论 | 第24-26页 |
第三章 GST-PAD4、GST-PAD4-NLS-融合蛋白纯化 | 第26-42页 |
1 材料 | 第26-27页 |
·菌株与载体 | 第26页 |
·试剂 | 第26页 |
·仪器 | 第26-27页 |
2 实验方法 | 第27-33页 |
·重组表达载体 GST-PAD4 阳性单克隆筛选 | 第27-28页 |
·GST-PAD4 融合蛋白试表达 | 第28-29页 |
·GST-PAD4 融合蛋白可溶性表达条件优化 | 第29-32页 |
·融合蛋白 GST-PAD4 的纯化 | 第32-33页 |
·融合蛋白 GST-PAD4-NLS-纯化 | 第33页 |
3 结果分析 | 第33-40页 |
·融合蛋白 GST-PAD4 的试表达 | 第33-34页 |
·温度对融合蛋白 GST-PAD4 可溶性的影响 | 第34-35页 |
·IPTG 浓度对融合蛋白 GST-PAD4 可溶性的影响 | 第35-37页 |
·菌液 OD_600值对融合蛋白 GST-PAD4 可溶性影响 | 第37-38页 |
·诱导时间对融合蛋白 GST-PAD4 可溶性影响 | 第38-39页 |
·融合蛋白 GST-PAD4、GST-PAD4-NLS-纯化 | 第39-40页 |
4 讨论 | 第40-42页 |
第四章 GST pull-down 方法初步筛查 PAD4 相互作用蛋白 | 第42-48页 |
1 材料 | 第42-43页 |
·试剂 | 第42页 |
·仪器 | 第42-43页 |
2 实验方法 | 第43-45页 |
·GST-PAD4、GST-PAD4-NLS-蛋白固化 | 第43页 |
·目的蛋白的捕获 | 第43-44页 |
·银氨染色 | 第44-45页 |
3 结果分析 | 第45-47页 |
·GST-PAD4、GST-PAD4-NLS-蛋白固化 | 第45页 |
·蛋白免疫印迹检测 PAD4 表达 | 第45-46页 |
·GST pull-down 方法初步筛查与 PAD4 相互作用蛋白 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-54页 |
附录 | 第54-57页 |
综述 | 第57-67页 |
参考文献 | 第64-67页 |
硕士期间发表的文章 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |